[发明专利]一种微球生物新材料包裹SOD活性药物载体制备方法

摘要

本发明公开了一种微球生物新材料包裹SOD药物载体制备方法，它由空白壳聚糖微球的制备、SOD壳聚糖微球的制备、SOD壳聚糖微球载药量及其包封率的测定、SOD壳聚糖微球体外释药试验完成其制备；本SOD壳聚糖微球在光学显微镜下观察表面光滑均匀，在生理盐水中分散性好，粒径范围1.2~3.8um；SOD壳聚糖微球制备过程反应条件温和，不需有机溶剂，pH接近中性，SOD的活性损失小；待测样品平均值0.3，壳聚糖微球中SOD含量5KU=10mg或5.31×10⁴U/g，包封率97.3%；本发明方法适于我国批量生产SOD保健品、美容酶制剂SOD化妆品，同时也为SOD药用酶制剂的生产应用提供了新的技术方法。

主权项

一种微球生物新材料包裹SOD活性药物载体制备方法，其特征是它由空白壳聚糖微球的制备1、SOD壳聚糖微球的制备2、SOD壳聚糖微球载药量及其包封率的测定3、SOD壳聚糖微球体外释药试验4四个步骤完成其制备方法：空白壳聚糖微球的制备1：取壳聚糖100g溶解于1000mL 2%冰醋酸溶液中，磁力搅拌，加吐温‑ 80 1.0mL，磁力搅拌和超声处理，滴加 30% Na₂SO₄ 溶液，至上述溶液混浊，通过紫外分光光度计于500 min处测定其浊度来判定微球的形成，微球形成后继续搅拌及超声处理1h，离心分离，取10000~ 12000 r/min，离心15 min，将所得沉淀物重新悬浮于水中洗涤纯化，冷冻干燥，备用；另用含0.2%吐温‑80的生理盐水分散，用扫描电子显微镜( SEM)和光学显微镜观察微球外观形态，粒度分析仪测定微球粒径分布，用光学显微镜采用显微计数法求平均粒径， 每次计数200个，计数3次；SOD壳聚糖微球的制备2：选择医用级SOD，酶活力大于5.0×10⁶ U/ g.蛋白样品，待配制，用100克冷冻干燥的空白壳聚糖微球悬浮于250mL醋酸缓冲液中( pH= 6. 2)，加入1g，5×10⁶U/ g SOD于1000 mL水溶液，4℃下磁力搅拌，10000~ 12000 r/min 离心沉淀，沉淀( 微球)以去离子水洗3次，真空干燥，于4℃储存；将沉淀物重新洗涤纯化、冷冻干燥；将离心液和洗涤液收集合并，得载药微球、分散液浓度为每10ml含SOD50000U(单位）微球合并液，即SOD微球合并液；SOD壳聚糖微球载药量及其包封率的测定3：根据SOD酶联免疫检测试剂提供的方法，用DG320酶联免疫检测仪，于492 nm 处测定吸光度值，绘制标准曲线；将上述SOD壳聚糖微球的制备2步骤所得的“SOD微球合并液”用PBS稀释至100mL，然后取10uL并用PBS稀释至100u L，作为待测样品，测定 A₄₉₂值；按下式计算SOD壳聚糖微球的载药量及包封率：载药量(%)=(投药量‑ 合并液中药量) /微球重量×100%包封率(%) =(投药量‑ 合并液中药量) /投药量×100%SOD壳聚糖微球体外释药试验4：取10mgSOD壳聚糖微球，混悬于10.0 mLPBS溶液( pH7.4，0.1 mol/ L)中，37℃恒温下磁力搅拌，按时取样离心(10 000 r/min)15min，取上清液10u L，按一定比例稀释，按上述SOD壳聚糖微球的制备2的方法测定SOD的浓度，以测算SOD的体外释放规律；在偏酸的条件下，水溶性药物如SOD较易被吸附进入壳聚糖微球内部，只需约6小时吸附即达平衡；在体外pH7.2缓冲液中，壳聚糖微球能够缓慢控制释放SOD，初始有药物突释现象，d10释放度约为38.6%，至d20累积释放度约75.1%。