[发明专利]重组汉逊酵母发酵工艺

摘要

本发明提供重组汉逊酵母发酵工艺，该工艺包括发酵培养、补料发酵和外源基因的诱导表达阶段。本发明采用特殊的基础盐培养基培养重组汉逊酵母，发酵24小时左右湿菌重达到120g/L‑150g/L；然后采用补料(葡萄糖)使汉逊酵母密度进一步增加至湿菌重220g/L‑230g/L；诱导阶段，采用特殊配方混合诱导剂(葡萄糖和甲醇不同比例、盐混合溶液和甲醇)进行诱导培养。本发明提供的特殊基础盐培养基和特殊混合诱导剂及流加方法，能够促进汉逊酵母生长，使发酵罐的菌体密度增加，提高诱导效率，减少死细胞比例。本发明提供的重组汉逊酵母发酵工艺，在原有基础上大大提高了植酸酶的产量，在3L的发酵液中，植酸酶的酶活高达2368U/mL左右。在饲料酶制剂的研发及实际生产中，具有良好的应用前景。

主权项

重组汉逊酵母发酵工艺，其特征在于，包括发酵培养、补料发酵和外源基因的诱导表达阶段；发酵阶段使用的发酵培养基配方如下：磷酸二氢铵12.5‑14.5g/L，七水合硫酸镁2.5‑3.5g/L，氯化钾2.5‑3.7g/L，氯化钠0.25‑0.45g/L，甘油15.0‑30.0g/L，乙二胺四乙酸二钠50.0‑70.0mg/L，六水合硫酸亚铁铵50.0‑70.0mg/L，五水合硫酸铜3.0‑6.0mg/L，七水合硫酸锌15.0‑25.0mg/L，一水合硫酸锰25.0‑28.0mg/L，二水合氯化钙0.8‑1.5g/L，异丙醇30.0‑35.0mg/L，D‑生物素0.3‑0.5mg/L，硫胺素120.0‑140.0mg/L，六水合硫酸镍0.50‑0.80mg/L，六水合氯化钴0.55‑0.80mg/L，硼酸0.55‑0.70mg/L，碘化钾0.6‑0.70mg/L和二水钼酸钠0.60‑0.80mg/L；培养温度控制在30℃±2℃，从发酵起始24小时内用氨水控制发酵液的pH值在4.2±0.5，直至发酵液中湿菌重达到120g/L‑150g/L；补料发酵阶段流加质量百分浓度45‑75％的葡萄糖溶液，补料4‑5小时，直至发酵液中湿菌重达到220g/L‑230g/L；诱导表达阶段采用不同浓度梯度的混合诱导剂进行诱导培养，温度控制在35℃±2℃，用氨水控制发酵液的pH值在3.8±0.5，诱导60‑96小时结束发酵；其中，从加入混合诱导剂开始，第一个12小时按15mL/h的流速流加质量百分浓度50％的葡萄糖溶液和甲醇按8:1体积比的混合液，第二个12小时流加质量百分浓度50％的葡萄糖溶液和甲醇按4:1体积比的混合液，第三个12小时流加质量百分浓度50％的葡萄糖溶液和甲醇按1:1体积比的混合液，第四个12小时流加质量百分浓度50％的葡萄糖溶液和甲醇按1:4体积比的混合液，第五个12小时至发酵结束流加盐溶液和甲醇按1:4体积比的混合液；其中盐溶液的配方为：磷酸二氢铵14.3g/L，七水合硫酸镁3.2g/L，氯化钾3.5g/L，氯化钠0.35g/L和葡萄糖22g/L；从第二个12小时流加开始，通过调节转速、空气流量以及混合液流速，控制溶氧在20％以上，当溶氧升至60％时，将混合液流速加大20％，如不能保持溶氧在20％以上，则停止混合液流加，直至溶氧回升。