[发明专利]鸡MHC B-G座位全序列测定和SNP检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201610280765.4 | 申请日： | 2016-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN105838798A | 公开（公告）日： | 2016-08-10 |
| 发明（设计）人： | 屠云洁;邹剑敏;束婧婷;章明;单艳菊;姬改革;龚建森;张笛 | 申请（专利权）人： | 江苏省家禽科学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 王玉霞 |
| 地址： | 225125 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了鸡MHC B‑G座位全序列测定和SNP检测方法及试剂盒，属于生物技术领域。检测方法包括：（1）引物设计：设计鸡MHC B‑G座位全序列测定的特异性引物，特异性引物包括SEQ ID NO 1‑12；（2）DNA提取：从鸡全血中提取DNA；（3）PCR扩增；（4）琼脂糖胶电泳检测；（5）对目的片段进行克隆、测序；（6）SNP分析：所获序列用Clustalw软件进行比对，与Genbank基因序列进行比较，统计单倍型和单核苷酸多态性（SNP）。试剂盒，包括6对特异性引物信息SEQ ID NO 1‑12，灭菌双蒸水，dNTP，Taq酶，PCR扩增缓冲液。本发明为测定鸡MHC B‑G座位基因全序列，分析鸡MHC B‑G座位遗传多样性提供了技术平台。 | ||
| 搜索关键词： | mhc 座位 序列 测定 snp 检测 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
鸡MHC B‑G座位全序列测定和SNP检测方法，其特征是，包括以下步骤：（1）引物设计：设计鸡MHC B‑G座位全序列测定的特异性引物，特异性引物包括SEQ ID NO 1‑12；（2）DNA提取：从鸡全血中提取DNA；（3）PCR扩增：以步骤（2）提取的DNA通过所述特异性引物SEQ ID NO 1‑6进行PCR扩增，获得目的片段；MHC B‑G座位特异性引物的PCR扩增在梯度PCR仪上进行；（4）琼脂糖胶电泳检测： PCR反应结束后，琼脂糖胶电泳检测反应是否成功，是否是目的片段；（5）对目的片段进行克隆、测序： PCR产物用1.0%的琼脂糖凝胶电泳分离，切胶，使用胶回收试剂盒回收，克隆，挑取单个白色菌落进行培养，挑选鉴定为阳性的克隆，双向测序；（6）SNP分析：将步骤（5）所获序列用Clustalw软件进行比对，与Genbank基因序列进行比较，统计单倍型和单核苷酸多态性SNP。
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