[发明专利]核酸信号放大序列及放大方法

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种核酸信号放大序列及核酸信号放大方法。本发明所述核酸信号放大序列包括一个前导序列和一个若干倍数的重复序列构成，所述前导序列与目的靶标序列互补，所述重复序列与报告探针序列互补。本发明所述核酸信号放大序列可以通过前导序列将目的靶标捕获杂交，再经过若干倍数的重复序列结合相应的报告探针即可实现信号放大，从而检测到目的靶标的核酸信号。相对于PCR技术需要酶来维系杂交体系，本发明可以实现不增加检测物浓度的前提下实现核酸物质的检测，且稳定性好，重复性高，成本低，检测流程短。

主权项

1.一种核酸信号放大序列的制备方法，其中核酸信号放大序列包括一个前导序列和一个若干倍数的重复序列构成，所述前导序列与目的靶标序列互补，所述重复序列与报告探针序列互补；所述前导序列与重复序列不同；前导序列的Tm值为55℃‑62℃；所述重复序列的Tm值小于55℃；前导序列5’端连接有限制性内切酶I的酶切位点，而该酶切位点经酶切后形成粘性末端，随后粘性末端经硫代三磷酸腺苷进行保护后补齐为平末端，获得包括硫代三磷酸腺苷保护的限制性内切酶I酶切位点酶切后的片段；核酸信号放大序列3’端包括限制性内切酶II的酶切位点酶切后的片段；所述限制性内切酶II的酶切位点酶切后为平整末端；所述核酸信号放大序列的制备方法包括以下步骤：A、根据目的靶标设计核酸信号前导序列和若干倍数的重复序列，并分别在前导序列5’端加上限制性内切酶I的酶切位点，在若干倍数的重复序列3’端加上限制性内切酶II的酶切位点；所述限制性内切酶I的酶切位点与核酸信号放大序列的前导序列相连，酶切后为粘性末端；所述限制性内切酶II的酶切位点与核酸信号放大序列的重复序列相连，酶切后为平整末端；B、合成序列插入载体后进行克隆复制；C、使用限制性内切酶I单酶切载体序列产生5’粘性末端，使用Kelnow大片段聚合酶和硫代三磷酸腺苷对5’粘性末端进行补平操作；再用限制性内切酶II将目的条带从载体上切除下来；D、核酸外切酶III酶切获得核酸信号放大序列；上述重复序列的若干倍数为5倍‑20倍。