[发明专利]一种利用聚乙烯亚胺提高RCA扩增效率的方法

摘要

本发明提供一种利用聚乙烯亚胺提高RCA扩增效率的方法，步骤如下：配置聚乙烯亚胺溶液，使用TempliPhi DNA测序模板扩增试剂盒，按照试剂盒的说明进行质粒的变性和培育操作，通过在滚环扩增过程中添加聚乙烯亚胺溶液，然后将RCA扩增产物于1％琼脂糖凝胶中进行电泳。本发明显著地提高滚环扩增的效率，增强滚环扩增的灵敏度，实现了对市售RCA试剂盒的进一步优化。

主权项

一种利用聚乙烯亚胺提高RCA扩增效率的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤(1)分别配置浓度为5×10^‑6(w/v)～5×10^‑8(w/v)的聚乙烯亚胺溶液，备用；步骤(2)使用TempliPhi^TMDNA测序模板扩增试剂盒对目标质粒进行扩增：A.变性：以PET22b‑IHF质粒DNA作为模板，在样品缓冲液中加入PET22b‑IHF质粒DNA，混匀，加热使其变性，后冷却，获得变性样品溶液；B.培育：在反应缓冲液中加入Phi29DNA聚合酶，混匀，置于冰上，得到预制混合酶液；将预混合酶液加入上述变性样品液中，混匀，得到RCA反应液；在RCA反应液中加入聚乙烯亚胺溶液，然后于30℃下水浴4‑18h；加热并灭活DNA聚合酶，冷却后；取RCA产物，混合loading buffer，于1％琼脂糖凝胶中进行电泳。