[发明专利]一种定量鉴别浙贝母的方法

摘要

本发明提供了一种定量鉴别浙贝母的方法，旨在提供一种鉴别准确率高、专属性强的定量鉴别浙贝母的方法，该方法依次包括下述步骤：1)引物的稀释；2)样品的前处理；3)DNA的提取；4)PCR反应液的配制；5)加模板；6)罗氏LightCycler96荧光定量PCR仪上机；7)数据处理；8)结果判定；属于化学检测技术领域。

主权项

一种定量鉴别浙贝母的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1)引物的稀释每管加超纯水0.29ml来稀释配制工作浓度为10μM的引物，将稀释好的引物涡旋振荡混匀使其充分溶解，放‑20℃冰箱保存备用；2)样品的前处理取1g试样，用研钵研成粉末，称取20mg至1.5mL或2ml灭菌离心管中；3)DNA的提取取前处理好的样品，采用磁珠法用核酸提取仪提取DNA，提取到的试样DNA置‑20℃保存备用；3)PCR反应液的配制依次称取下述物质：2x荧光定量预混试剂彩色版10μl；5‑ACAGTACTGGGGGAGAAGTC‑30.5μl；5‑CAAATGGAGGGTATGTGTCG‑30.5μl，无RNA酶水7μl，将各个试剂加入至干净的离心管中，涡旋振荡混匀后，放冰盒上待用，取出干净灭菌的PCR八联管固定在PCR管盒上，将冰盒上的反应液短暂离心后，轻轻打开盖子，往PCR管中分装反应液，每管18μl，管中尽量避免气泡的存在；4)加模板往上述含有反应液的PCR管中加入2μl提取好的DNA，轻轻敲打PCR管盒，使反应液与DNA混匀，并经3000转离心数30S，立即进行PCR反应；6)罗氏LightCycler96荧光定量PCR仪上机；7)数据处理将数据同步至电脑上，设置阴性对照、阳性对照、检品类型；选择定性检测对试样进行分析；8)结果判定阴性对照需无Cq值，曲线为直线或轻微斜线，无明显指数增长期；阳性对照需Cq≤30，曲线有明显指数扩增期；样品若无Cq值，曲线为直线或轻微斜线，无明显指数增长期，可判为非浙贝母；样品若Cq值≤36，曲线有明显指数扩增期，可判为浙贝母。