[发明专利]一种可对依诺肝素钠中五糖结构单元进行定性和定量分析的方法有效
| 申请号： | 201610209936.4 | 申请日： | 2016-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN107271526B | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 康经武;张明瑜 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海有机化学研究所 |
| 主分类号： | G01N27/447 | 分类号： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙) 31258 | 代理人： | 何葆芳 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： |
本发明公开了一种可对依诺肝素钠中五糖结构单元进行定性和定量分析的方法，其包括如下步骤：a)利用抗凝血酶III的亲和色谱柱对依诺肝素钠样品进行分离并制备成多个不同亲和活性的组分；b)用混合肝素酶对依诺肝素钠样品及多个不同亲和活性的组分分别进行完全酶解；c)对每一个完全酶解产物分别进行毛细管电泳分离分析；d)根据公式： |
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| 搜索关键词： | 一种 肝素钠 中五糖 结构 单元 进行 定性 定量分析 方法 | ||
【主权项】：
1.一种可对依诺肝素钠中五糖结构单元进行定性和定量分析的方法，其特征在于，包括如下步骤：a)利用抗凝血酶III的亲和色谱柱对依诺肝素钠样品按亲和活性进行分离并制备成多个不同亲和活性的组分；所述的抗凝血酶III的亲和色谱柱的制备包括如下步骤：①使过量的依诺肝素钠样品与抗凝血酶III进行孵育，以激活抗凝血酶III并占据其活性位点；②使活性位点被保护的抗凝血酶III以共价键固定到色谱柱内的水化填料上；其中，依诺肝素钠与抗凝血酶III的质量比为2.5:1～5:1；进行孵育的缓冲溶液的pH为8.0～8.5、是由150～250mmol/L的碳酸氢钠溶液与450～550mmol/L的氯化钠溶液形成；1毫升水化填料中含抗凝血酶III的质量≤5毫克；b)用混合肝素酶对依诺肝素钠样品及步骤a)所制备的多个不同亲和活性的组分分别进行完全酶解；c)对步骤b)所得到的每一个完全酶解产物分别进行毛细管电泳分离分析；d)根据公式：![]()
计算步骤c)所分离的各个成分的电泳淌度，其中：LT和LD分别是毛细管的总长和有效长度，V为分离电压，t为迁移时间；e)结合寡糖的电荷质量比与电泳淌度之间的如下线性关系：![]()
对每一个完全酶解产物的毛细管电泳图中的分离峰所对应的酶解产物进行鉴定，以定性确定出五糖结构单元酶解片段的分离峰；其中：Z/M为寡糖电荷质量比，μ为对应的电泳淌度；f)根据所确定的五糖结构单元酶解片段的分离峰的峰面积，采用面积百分数归一化方法，定量计算出五糖结构单元的含量。
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