[发明专利]一种评价昆虫中肠消化酶对Bt蛋白活化作用的方法有效
| 申请号： | 201610089908.3 | 申请日： | 2016-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN105624267B | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 魏纪珍;梁革梅;王冰洁;陈琳;张万娜 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/37 | 分类号： | C12Q1/37 |
| 代理公司： | 11002 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种评价昆虫中肠消化酶对Bt蛋白活化作用的方法，其是将特异性消化酶抑制剂与昆虫中肠消化酶液按比例混合，在体外对Bt蛋白原毒素进行活化，然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对活化效果进行分析，用软件ImageJ 1.46对结果进行统计，最后通过方差分析来评价中肠消化酶参与的Bt蛋白活化作用。本方法可操作性强，准确高效，可用于评价哪些不同的消化酶参与了不同类Bt蛋白的活化，同时还可以分析不同消化酶在活化Bt蛋白中的主次作用，对于选择合理的Bt组合杀虫剂或转叠加基因作物具有借鉴作用。此外，该方法可应用于对Bt生化水平抗性的评价工作。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 评价 昆虫 消化酶 bt 蛋白 活化 作用 方法 | ||
【主权项】：
1.一种评价昆虫中肠消化酶对Bt蛋白活化作用的方法，其特征在于，将特异性消化酶抑制剂与昆虫中肠消化酶液按比例混合，在体外对Bt蛋白原毒素进行活化，然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对活化效果进行分析，用软件ImageJ 1.46对结果进行统计，最后通过方差分析来评价中肠消化酶参与的Bt蛋白活化作用；/n包括以下步骤：/n1)配制一定浓度的昆虫中肠消化酶液；/n2)将一定浓度的特异性消化酶抑制剂溶液与步骤1)的昆虫中肠消化酶液按不同比例混合，再与一定浓度的Bt蛋白原毒素溶液混合孵育一段时间，用蛋白上样缓冲液终止反应，在沸水中煮5-10min后，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马斯亮蓝染色；/n3)根据染色结果，用软件ImageJ 1.46对Bt蛋白原毒素的活化效果进行定量分析，最后用软件SPSS 18.0进行方差分析来评价中肠消化酶参与的Bt蛋白活化作用；/n步骤2)中同时设立不含有所述特异性消化酶抑制剂的昆虫中肠消化酶液为空白对照，即将不含有所述特异性消化酶抑制剂的昆虫中肠消化酶液与Bt蛋白原毒素混合孵育。/n
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