[发明专利]一种胚胎干细胞分化的肝细胞的分选方法

摘要

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种胚胎干细胞分化的肝细胞的分选方法。本发明将胚胎干细胞摇动培养或悬浮培养为拟胚体，然后将拟胚体贴壁培养，逐渐生长分化为圆形的分化细胞群落，根据分化肝细胞在圆形细胞群落中的空间分布规律，在特定时期选择特定区域的细胞进行分选并重新贴壁培养。在上述贴壁培养过程中，根据细胞分化情况，选择EGF、TGF、HGF、OSM等作为拟胚体向肝细胞分化过程中的肝性生长因子，以促进肝细胞分化，整个分选过程操作简单、成本低、可明显减轻细胞损伤、干细胞分化率相较于现有技术得到大幅度提高，分选后的细胞生长状态良好，可满足肝细胞移植的细胞纯度和细胞功能要求。

主权项

一种胚胎干细胞分化的肝细胞的分选方法，其特征在于包含如下步骤：(1)胚胎干细胞在拟胚体液体培养基中摇动培养或悬浮培养开始分化，得到拟胚体；(2)将步骤(1)得到的拟胚体进行贴壁培养，每个拟胚体以贴壁点为中心向四周辐射分化生长形成细胞分化群落；胚胎干细胞分化至第15d时，刮取位于细胞分化群落区域1和/或细胞分化群落区域2的正常生长状态细胞，将其再次贴壁培养，得到胚胎干细胞分化的肝细胞；步骤(2)中所述的区域1为位于细胞分化群落中心区域且其边缘至细胞分化群落中心的距离不超过细胞分化群落半径的1/4；步骤(2)中所述的区域2为细胞分化群落区域3之外的区域；所述的区域3为位于细胞分化群落中心区域且其边缘至细胞分化群落中心的距离为细胞分化群落半径的3/4。