[发明专利]促癌活性的定量检测方法以及促癌剂的筛选方法

摘要

一种定量检测待测物的促癌活性的方法，包括以下步骤选择适宜细胞模型，按照需求分为供体细胞和受体细胞；在供体细胞中同时加入两种荧光探针并孵育；供体细胞和受体细胞按比例混合培养；受试组混合培养细胞中加入待测物，对照组不添加；孵育一定时间后，流式细胞计测量受试组和对照组供体细胞中一种荧光探针转移至受体细胞的单阳性细胞个数；计算两组的Te值(转移效率，Transfer effects)，分别用Tecon和Tetest表示，Te值＝单阳性细胞数/供体细胞数×100％；用TeR表示该待测物的Te相对值，TeR＝Tetest/Tecon×100％；根据待测物的TeR评价待测物的促癌活性大小，TeR越小表明该待测物的促癌活性越强。还涉及上述方法在体外筛选促癌剂中的应用，当TeR小于90％时，鉴定为促癌剂。

主权项

一种定量检测待测物的促癌活性的方法，包括以下步骤：1)选择适宜的细胞模型，按照相应细胞培养条件培养细胞；2)之后用消化液消化细胞，按照所需量分为供体细胞和受体细胞培养箱静置备用；3)在供体细胞中同时加入两种荧光探针，孵育一段时间；受体细胞静置备用；将所有供体和受体细胞分为对受试组和对照组，将受试组和对照组的供体细胞和受体细胞分别按比例混合培养于培养板中；在受试组的供体细胞和受体细胞中加入待测物，对照组不加待测物；其中，两种荧光探针分别为Calcein AM和DiI探针，Calcein AM探针的浓度为1～10μM，DiI探针的浓度为1～15μM；4)经过一段时间孵育，使受试组和对照组的供体细胞和受体细胞分别流经流式细胞计，通过流式细胞计分别测量受试组和对照组的供体细胞将其中一种荧光探针转移至受体细胞的单阳性细胞个数；5)分别计算受试组待测物和对照组的Te值(转移效率，Transfer effects)，分别用Tecon和Tetest表示，Te值＝单阳性细胞数/供体细胞数×100％；6)计算该待测物的Te相对值，用TeR表示，TeR＝Tetest/Tecon×100％；根据待测物的TeR评价待测物的促癌活性大小，TeR越小表明该待测物的促癌活性越强。