[发明专利]桔青霉毒素-蛋白载体人工偶联抗原的碳二亚胺合成法

摘要

本发明提供一种桔青霉毒素­-蛋白载体人工偶联抗原的碳二亚胺合成法，采用水溶性1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）-碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）作为偶联剂。桔青霉毒素先进行活化，而后与偶联试剂相互反应，之后与蛋白载体进行偶联，最后经透析纯化得到桔青霉毒素—蛋白载体人工偶联抗原。本发明方法反应条件温和，能够生产出灵敏度高、特异性强、稳定性好的抗桔青霉毒素单克隆抗体；制备过程简便可行，耗时短，容易规模化生产和推广应用。

主权项

一种桔青霉毒素­‑蛋白载体人工偶联抗原的碳二亚胺合成法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）桔青霉毒素的活化预处理：将1 mg桔青霉毒素溶解于1 mL的活化缓冲液中，加入偶联试剂，摇匀后，室温避光进行偶联反应15min；（2）过量1‑乙基‑3‑（3‑二甲基氨基丙基）‑碳二亚胺的处理：向活化缓冲液中加入1.4 μL β—巯基乙醇，中和剩余的过量1‑乙基‑3‑（3‑二甲基氨基丙基）‑碳二亚胺；（3）蛋白载体的预处理：按照桔青霉毒素与蛋白载体初始摩尔比为10:1—50:1称取蛋白载体，溶解于1 mL偶联缓冲液中；（4）桔青霉毒素与蛋白载体偶联反应：调整活化缓冲液的pH至7.0以上，之后与偶联缓冲液混合，摇匀后，室温避光反应2h；（5）透析纯化：待反应结束后将反应液取出，以0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液为透析液，4 ℃透析48 h，每间隔12 h更换1次透析液，之后收集透析袋内溶液，进行紫外全波长扫描，计算偶联比，并将偶联产物冷冻干燥后‑20 ℃保存，得到桔青霉毒素—蛋白载体人工偶联抗原。