[发明专利]青花菜品种台绿1号杂交种的快速鉴定方法

摘要

本发明提供了一种能够快速、准确、高效地对青花菜品种‘台绿1号’杂交种进行分子鉴定的方法，取待测样品提取基因组DNA后进行PCR扩增，PCR引物为：5’-TCTCTCTCTCTCTCTCN-3’，PCR扩增产物进行凝胶电泳成像分析，以同时扩增出约800bp和约600bp的条带，判断待测样品为‘台绿1号’杂交种单株；并可计算待测样本遗传纯度（杂交种遗传纯度=真杂交种株数÷待测样品株数×100%）。本发明使用的ISSR引物TNISSR15鉴定青花菜‘台绿1号’杂交种纯度的准确性高，与田间鉴定结果相符度达99%，结果可靠；鉴定在10天以内即可完成，避免了田间种植鉴定的繁琐程序，节约了劳动力和土地资源，鉴定成本降低；能在制种当年确定种子遗传纯度，便于种子定级与收购，提高了鉴定效率。

主权项

青花菜品种‘台绿1号’杂交种的快速鉴定方法，所述方法包括：（1）待测青花菜样品的基因组DNA的提取；（2）PCR扩增；扩增引物序列如下：5’‑TCTCTCTCTCTCTCTCN‑3’；PCR反应体系每15μL组成如下：待测样品基因组DNA10ng，10μM引物0.85μL，25mM Mg²⁺0.6μL，10mM dNTP0.3μL，5U·μL^‑1Taq DNA聚合酶0.15μL，10×buffer1.5μL，无菌重蒸水补齐至15μL；PCR反应条件如下：94℃预变性4min，94℃变性0.5min，51℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存；（3）结果分析：取PCR产物与含8%GelRad核酸染料的Loading Buffer混合后上样于2%琼脂糖凝胶上，电泳分离后进行凝胶成像，以同时扩增出约800bp和约600bp的条带，判断待测样品为‘台绿1号’杂交种单株；否则不属于台绿1号’杂交种。