[发明专利]胸腺肽α1

摘要

本发明涉及胸腺肽α1的非线性固相合成方法，方法特征在于偶联Ser‑Ser片段时，偶联的位点是Ser的侧链羟基而不是常规的N端氨基。待肽链合成后，在合适的条件下进行，酯键会重组形成酰胺结构，从而得到胸腺肽α1。本发明的方法相对于传统的线性固相合成方法而言，不仅保持了操作简便、后处理容易等优点，还由于降低β‑折叠带来的偶联困难以及缓解空间位阻等效应而带来收率高、纯度好的优势，为胸腺肽α1的大规模生产提供了一种全新的思路。

主权项

一种合成胸腺肽α₁的方法，包括下述步骤： （1）以Rink Amide树脂为载体，与Fmoc‑Asp‑OtBu合成Fmoc‑Asp(树脂)‑OtBu，然后按照胸腺肽α₁的肽序，采用固相多肽合成方法在Fmoc‑Asp(树脂)‑OtBu的基础上从C端到N端逐一偶联氨基酸，在此步骤中，偶联的最后一个氨基酸为胸腺肽α₁肽序中N端第9位的丝氨酸，得到如下的肽树脂A: Boc‑Ser‑Glu(OtBu)‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asp(树脂)‑OtBu； （2）用Fmoc‑Ser(tBu)‑OH与上述肽树脂A的N端的丝氨酸的游离羟基反应，形成酯键。然后按照胸腺肽α₁的肽序，采用固相多肽合成方法顺序偶联余下的氨基酸，且用乙酰基封闭末端丝氨酸，得到如下的肽树脂B Boc‑Ser((Ser(tBu)‑Thr(tBu)‑Asp(OtBu)‑Val‑Ala‑Ala‑Asp(OtBu)‑Ser(tBu)‑Ac))‑Glu(OtBu)‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Ly s(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asp(树脂)‑OtBu； （3）将肽树脂B进行裂解，得到如下的多肽片段b: NH₂‑Ser(O‑Ser‑Thr‑Asp‑Thr‑Val‑Ala‑Ala‑Asp‑Ser‑Ac)‑Glu‑Ile‑Thr‑Thr‑Lys‑Asp‑Leu‑Lys‑Glu‑Lys‑Lys‑Glu‑Val‑Val‑Glu‑Glu‑Ala‑Glu‑Asn‑OH； （4）将多肽片段b溶于缓冲盐体系中，在适合的条件下，多肽片段b中的酯键发生结构重组，得到胸腺肽α₁： Ac‑Ser‑Asp‑Ala‑Ala‑Val‑Asp‑Thr‑Ser‑Ser‑Glu‑Ile‑Thr‑Thr‑Lys‑Asp‑Leu‑Lys‑Glu‑Lys‑Lys‑Glu‑Val‑Val‑Glu‑Glu‑Ala‑Glu‑Asn‑OH。