[发明专利]人胚胎干细胞衍生的间充质样干细胞、方法及其应用

摘要

本发明涉及产生和扩增人胚胎干细胞衍生的间充质样干细胞/基质细胞的方法。至少部分程度上通过表达低水平的IL‑6对这些hES‑MSCs进行鉴定。这些细胞可用于预防和治疗T细胞相关的自身免疫性疾病，尤其是多发性硬化症，以及用于将药剂递送通过血脑屏障和血脊髓屏障。还提供选择临床级别hES‑MSC的方法以及修饰MSC以产生具有独特生物标记特性的MSC的方法。修饰的MSC可用于治疗各种疾病。

主权项

一种产生用于治疗自身免疫性疾病的临床级别间充质干细胞的方法，其中所述方法包括以下步骤：a.使用含或不含GSK3抑制剂的无血清培养基培养人胚胎干细胞；b.将人胚胎干细胞培养在包含血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白4(BMP4)的无血清培养基中，其中，血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白4的量足以诱导所述人胚胎干细胞形成胚状体；c.向培养物中添加至少一种生长因子，其中，所述生长因子的量足以扩增人血管集落形成细胞；d.把所述血管集落形成细胞分散成单细胞；和e.将所述单细胞培养在1)含10‑20％FBS的alpha‑MEM、2)含10‑20％KOSR的alpha‑MEM、3)含10‑20％FBS的高糖DMEM、或4)含10‑20％KOSR的高糖DMEM培养基中，其中，培养基的量足以诱导所述单细胞分化为间充质干细胞；所述间充质干细胞具有以下特征：(i)包含>95％的细胞表达组‑1标记；(ii)包含>80％的细胞表达组‑2标记；(iii)包含<5％的细胞表达组‑3标记；(iv)表达IL‑10和TGFβ；(v)包含<2％的细胞表达IL‑6、IL‑12和TNFα；(vi)包含<0.001％的细胞共表达所有组‑4标记，其中，组‑1标记是：CD73、CD90、CD105、CD146、CD166和CD44，组‑2标记是：CD13、CD29、CD54和CD49E，组‑3标记是：CD45、CD34、CD31和SSEA4，组‑4标记是：OCT4、NANOG、TRA‑1‑60和SSEA4。