[发明专利]一种盐酸高血糖素的纯化方法

摘要

本发明涉及一种盐酸高血糖素的纯化方法。具体而言，所述方法包括以体积比30%—60%的醋酸和5%—20%的乙腈水溶液溶解粗肽，得到粗肽溶液；将所得粗肽溶液采用色谱法梯度洗脱纯化，以体积比0.1%—0.4%的硫酸和体积比0.1%—0.4%高氯酸的水溶液用氨水调pH值2.5—3.5后的溶液为A相，乙腈为B相，梯度B%20%—45%洗脱；盐析；在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上采用色谱法将盐析后的样品转盐和脱盐，以体积比为0.1‑0.8%的醋酸铵水溶液为A相，乙腈为B相，梯度B%3%—10%梯度冲洗15‑30分钟后，再用盐酸水溶液‑乙腈体系转盐洗脱。

主权项

一种盐酸高血糖素的纯化方法，包括以下步骤：1)前处理：以体积比30％—60％的醋酸和5％—20％的乙腈水溶液按照浓度20g/L—50g/L溶解粗肽，用水将粗肽溶液中的醋酸与乙腈二者的总体积百分数稀释到10％—30％；2)纯化：将步骤1)所得粗肽溶液进行色谱法梯度洗脱纯化，以体积比0.1％—0.4％的硫酸和体积比0.1％—0.4％高氯酸的水溶液用氨水调pH值2.5—3.5后的溶液为A相，乙腈为B相，梯度：B％：20％—40％洗脱，收集纯化的高血糖素硫酸盐溶液；3)使所得高血糖素硫酸盐溶液盐析；4)转盐：用反相高效液相色谱法将步骤3)所得高血糖素的硫酸盐样品转盐，将步骤3)所得的高血糖素样品上样，然后以质量/体积比0.1％—0.8％的醋酸铵水溶液为A相，乙腈为B相，梯度：B％为3％—10％梯度或等度冲洗15—30分钟；用盐酸水溶液乙腈体系洗脱，所述盐酸水溶液的浓度为0.1％—0.4％，该洗脱步骤所采用的乙腈浓度为40％以上，收集盐酸高血糖素溶液；其中所述步骤2)和4)中的色谱法使用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；其中所述步骤3)的盐析包括：通过常温旋蒸的方法将步骤2)所得溶液中乙腈的比例降至15％以下，将所得溶液的pH值用稀氨水调至6.0～7.0后放置到2‑8摄氏度2～20小时，得到其中高血糖素样品析出的浑浊液，将所得浑浊液进行离心处理，上清液作为废液处理，下层固体用60％～100％的高氯酸水溶液将其溶解后，再用注射用水稀释一倍后转入步骤4)即可。