[发明专利]灵芝子实体多糖注射剂及其制备方法有效
申请号: | 201310564347.4 | 申请日: | 2013-11-14 |
公开(公告)号: | CN103550147A | 公开(公告)日: | 2014-02-05 |
发明(设计)人: | 谢宝贵;江玉姬;何安乐;肖淑霞;李晔;刘新锐;邓优锦 | 申请(专利权)人: | 福建农林大学 |
主分类号: | A61K9/08 | 分类号: | A61K9/08;A61K31/715;A61P37/02;A61P35/00;A61P31/00;A61P3/10;A61P3/06;A61P39/06;C08B37/00 |
代理公司: | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人: | 蔡学俊 |
地址: | 350002 福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | 本发明涉及一种灵芝子实体多糖注射剂及其制备方法。灵芝子实体多糖注射剂的制备方法包括灵芝子实体多糖水提液的Severage法去蛋白、DEAE-52纤维素柱层析纯化、灵芝子实体多糖纯品的制备、灵芝子实体多糖注射液的制备。灵芝子实体多糖有许多的生物活性,包括调节免疫功能、抗肿瘤、抗感染、降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、清除自由基、促进核酸与蛋白质生物合成等。但目前的灵芝多糖药品多为口服药剂,灵芝子实体多糖的活性会因口服而受到限制,而注射剂通过静脉注射或腹腔注射能够直接进入人体直接起药效作用,是口服的药效不可比拟的。目前市场上还没有灵芝子实体多糖的注射剂,本发明开发的灵芝子实体多糖注射剂是安全的,可供医学临床应用。 | ||
搜索关键词: | 灵芝 实体 多糖 注射 及其 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种灵芝子实体多糖注射剂的制备方法,包括灵芝子实体多糖水提液去蛋白、纯化、灵芝子实体多糖注射液制备,其特征在于制备步骤如下:(1)灵芝子实体多糖水提液去蛋白:把灵芝子实体水提物,放入烘箱105℃烘至恒重,称取灵芝子实体多糖粉于烧杯中,加入去离子水,其中灵芝子实体多糖粉与水的重量比为1︰240~250,沸水水浴1h后5000r/min 离心20 min,取上清液,在旋转蒸发仪中100r/min,75℃浓缩至含水率为19%~20%,得灵芝子实体多糖浓缩物,将灵芝子实体多糖浓缩物用Sevage法进行脱蛋白处理,取脱蛋白处理后的上清液加入4~5倍体积的无水乙醇,放置冰箱4℃过夜,5000r/min离心10min取沉淀物,并于烘箱105℃干燥;将烘干的干物质利用索氏提取器,在75℃下分别用丙酮、无水乙醚和无水乙醇回流6h,沉淀物105℃烘干,获得脱蛋白灵芝子实体多糖;所述Sevage试剂,即氯仿与乙醇体积比为5:1的混合液;所述将灵芝子实体多糖浓缩物进行脱蛋白处理,即往灵芝子实体多糖浓缩物中加入2倍重量的 Sevage试剂,涡旋振荡仪上3000r/min震荡10min后,10000r/min离心10min,取上清液;加入重量为上清液2倍的Sevage试剂,涡旋振荡仪上3000r/min震荡10min后,10000r/min离心10min,取上清液,如此反复处理 8次,得脱蛋白处理后的上清液;(2)纯化:A、DEAE‑52纤维素柱层析阶段性梯度洗脱:取步骤(1)制备的脱蛋白灵芝子实体多糖,加入重量比为19~20︰1的去离子水溶解,并用DEAE‑52纤维素柱层析纯化;层析柱的规格是2.6×60cm,装柱高为35cm,先用去离子水洗柱,而后用浓度为0.1mol/L的NaCl溶液洗脱,最后用浓度为0.5mol/L的NaCl溶液进行洗脱,洗脱流速为1.3mL/min,每300s收集一管,每管6.5mL,计滴自动部份收集器自动收集洗脱液,取对应管号为28~44管的洗脱液,合并为DEAE‑52纤维素柱层析阶段性梯度洗脱液;B、灵芝子实体多糖纯品的制备取步骤A的DEAE‑52纤维素柱层析阶段性梯度洗脱液用去离子水透析48h后,在旋转蒸发仪中100r/min,75℃浓缩至10mL~20 mL,并加入4~5倍体积无水乙醇,醇沉,取沉淀物并105℃干燥,获得灵芝子实体多糖纯品;(3)灵芝子实体多糖注射液的制备取注射生理盐水复溶灵芝子实体多糖纯品,使溶液中灵芝子实体多糖浓度为2.1mg/mL,按活性炭与生理盐水的重量体积比(mg/mL)为0.04%,加入活性炭,沸水煮浴20min,45μm过滤后装瓶灭菌。
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