[发明专利]重组华溪蟹金属硫蛋白(rcMT)及其单克隆抗体的制备

摘要

本发明提供了一种操作简便、成本低廉、纯度高、活性好的可溶性重组华溪蟹金属硫蛋白（rcMT）的制备方法，该方法先以phoA质粒作为表达载体，构建phoA-MT重组表达载体；再转化大肠杆菌BL21，构建大肠杆菌工程菌株phoA-MT/BL21，并将工程菌接种于LB培养基中制备种子，然后稀释菌至低磷培养基诱导、表达，利用Ni sepharoseTM6Fast Flow亲和层析纯化获得重组华溪蟹金属硫蛋白。利用重组华溪蟹金属硫蛋白制备得到抗华溪蟹金属硫蛋白单克隆抗体，该抗体灵敏性高、特异性强，可应用于金属硫蛋白的ELISA定量检测。

主权项

一种可溶性重组华溪蟹金属硫蛋白（rcMT）的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）以含有phoA启动子及可分泌至细胞周质的信号序列的phoA质粒作为表达载体，构建phoA‑MT重组表达载体；2）按照标准方法转化大肠杆菌BL21,构建大肠杆菌工程菌株phoA‑MT/BL21；将工程菌接种于LB培养基中制备种子，然后按照2.5%稀释phoA‑MT/BL21菌至低磷培养基诱导，同时加入1mM ZnSO4，30℃，165r/min诱导培养22h；所述的低磷培养基配方如下：2.5g/L胰蛋白胨，0.25g/L酶母提取物，3g/L(NH4)2SO4,，5g/LNacl,，1g/LMgSO4，4g/L葡萄糖；3）收集菌体，冰浴超声破碎细胞，离心后收集上清；Ni sepharoseTM6Fast Flow亲和层析纯化。