[发明专利]利用链格孢属微生物胞内酶转化葡萄糖生成白藜芦醇的方法

摘要

本发明涉及一种利用链格孢属微生物胞内酶转化葡萄糖生成白藜芦醇的方法。白藜芦醇的生产主要依赖于从植物中直接提取，其中能够广泛用于生产的主要植物是中药材野生虎杖的根茎，严重地限制了该产业的发展。本发明将链格孢属CCTCC No:M2011348菌株接种于液体培养基中培养后，过滤收集菌丝体，洗净研磨破碎，加入粗酶提取液，离心后收集上清液，加入固体硫酸铵，静置过夜后离心收集沉淀得粗酶液；取缓冲液，加入粗酶液，反应得到白藜芦醇。本发明利用链格孢属微生物的胞内酶为催化剂，以葡萄糖为底物，在温和的反应体系转化合成白藜芦醇，安全环保，生产效率高，可控性强，生产成本低，适合大规模工业生产。

主权项

利用链格孢属微生物胞内酶转化葡萄糖生成白藜芦醇的方法，其特征在于：由以下步骤实现：步骤一：酶液的制备：（1）将链格孢属CCTCC No: M2011348菌株接种于液体培养基中，在28℃、120 rpm的条件下培养4天；（2）取培养物用过滤法收集菌丝体，并用蒸馏水冲洗干净；（3）将所得菌丝体在液氮中研磨破碎，按每4.0 g 菌丝体加入8 ml粗酶提取液的比例加入粗酶提取液，混合均匀后，在温度4℃、转速1000rpm的条件下离心10min，收集上清液；（4）在上清液中加入固体硫酸铵至其饱和浓度为75%，4℃静置过夜后在1000rpm转速下离心10 min，收集沉淀并用（3）中的粗酶提取液溶解后放入透析袋中，在4℃透析至无SO42－检出为至，透析袋中所得液体即为粗酶液；步骤二：生成白藜芦醇：取100 mL缓冲液，加入步骤一得到的粗酶液5‑50 mL，在温度37℃、转速120 rpm的条件下反应0.5～4 h，得到白藜芦醇。