[发明专利]通过麦粒培养基制备纯化ZEN毒素的方法有效
| 申请号： | 201310310376.8 | 申请日： | 2013-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN103351371A | 公开（公告）日： | 2013-10-16 |
| 发明（设计）人： | 董飞;徐剑宏;祭芳;殷宪超;史建荣 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C07D313/00 | 分类号： | C07D313/00 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 孙忠浩 |
| 地址： | 210014*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种通过麦粒培养基制备纯化ZEN毒素的方法，利用ZEN毒素苯环结构上羟基所具有的酸性，从接种禾谷镰刀菌的麦粒培养基中提取含有ZEN毒素的粗提液，其特征在于：将含有ZEN毒素的粗提液通过氢氧化钠过量碱化，使ZEN毒素溶解于水中，与有机溶剂分离；通过酸化调节含有ZEN毒素的水相至pH2.0~7.0，恢复结构，加入有机试剂使ZEN毒素重新溶解于有机试剂中，与水相分离，浓缩有机试剂得到ZEN粗毒素；采用制备型液相色谱对ZEN毒素在液相色谱上的紫外吸收峰进行回收，获得制备的ZEN毒素。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 麦粒 培养基 制备 纯化 zen 毒素 方法 | ||
【主权项】：
一种通过麦粒培养基制备纯化ZEN毒素的方法，利用ZEN毒素苯环结构上羟基所具有的酸性，从接种禾谷镰刀菌的麦粒培养基中提取含有ZEN毒素的粗提液，其特征在于：将含有ZEN毒素的粗提液加入过量的氢氧化钠碱化，使ZEN毒素溶解于水中，与有机溶剂分离；通过酸化调节含有ZEN毒素的水相至pH2.0~7.0，恢复结构，加入有机试剂使ZEN毒素重新溶解于有机试剂中，与水相分离，浓缩有机试剂得到ZEN粗毒素；采用制备型液相色谱对ZEN毒素在液相色谱上的紫外吸收峰进行回收，获得制备的ZEN毒素，具体的步骤是：a) 将禾谷镰刀菌活化后接到绿豆汤液体培养基中，28℃摇床振荡培养5天后用灭菌纱布过滤得到禾谷镰刀菌孢子液，孢子液浓度为1×107 个/ml ，取2ml孢子液接到200g麦粒培养基中，28℃光培养25天，获得含有ZEN毒素的培养物；b) 称取100g含有ZEN毒素的培养物，加入500ml体积比80:20的乙腈/水提取液，摇床室温振荡30分钟，离心后收集含有ZEN毒素的粗提液；c) 将含有ZEN毒素的粗提液旋转蒸干后加入20ml色谱纯甲醇重新溶解，取2ml用于粗提液的检测，重新蒸干剩余粗提液后加入50ml体积比1:1的三氯甲烷/水溶液重新溶解，加入过量的氢氧化钠固体，直到氢氧化钠不能溶解为止，混匀分层后取上层提取物；d) 将c步骤上层提取物装入试管，然后加入盐酸酸化，调节至pH2.0~7.0后加入等体积的三氯甲烷，混匀分层后取下层，旋转蒸干下层后重新溶解在色谱纯的甲醇中，采用高效液相色谱检测pH2.0~7.0条件下ZEN毒素含量；高效液相色谱检测条件为：流速V=0.6ml/min，紫外吸收波长λ=236nm，流动相中甲醇与水的体积比为80:20，利用制备型液相色谱的馏分收集器收集在8.00‑8.70 min之间含有ZEN毒素的流动相，获得纯化的ZEN毒素；所述的绿豆汤培养基为：准确称取绿豆3g，加入100ml单蒸水，电磁炉加热至绿豆表皮开始破裂，纱布过滤后定容至100ml，装入250ml三角瓶，121℃灭菌30分钟；所述的麦粒培养基为：将麦粒经单蒸水浸泡过夜后，去除单蒸水将湿麦粒装入灭菌袋中，121℃灭菌30分钟。
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- 一类布雷菲徳菌素A的碳酸酯类化合物及其制备方法和用途，涉及布雷菲德菌素A的衍生物。将(+)-Brefeldin A、4-二甲氨基吡啶和三乙胺溶于第一有机溶剂中，冰盐浴冷却，再加入含有氯甲酸对硝基苯酯的第一有机溶剂，室温继续反应，反应液减压浓缩除去第一有机溶剂，残留物用第二有机溶剂硅胶柱层析分离，再用第二有机溶剂重结晶后得到(+)-BrefeldinA-4,7-二对硝基苯基碳酸酯，再与DMAP和三乙胺溶于第一有机溶剂中，冰浴冷却，加入醇，室温继续反应，反应液减压浓缩后得到的残留物用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂硅胶柱层析分离，得布雷菲德菌素A的碳酸酯类化合物。可在制备抗肿瘤药物中应用。
- 专利分类
