[发明专利]一种制备b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的方法

摘要

本发明公开了一种制备b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的方法，它包括以下步骤：S1、多糖的凝胶过滤层析纯化，得大分子Hib荚膜多糖；S2、多糖-TT结合物的制备，它包括以下子步骤：S21、向大分子Hib荚膜多糖溶液中加入CNBr活化15～25分钟，再加入己二酰肼进行10～20分钟衍化反应，去掉残余CNBr，得到多糖-AH衍生物；S22、在多糖-AH衍生物溶液中加入TT溶液，混匀后置冰浴中，加入EDAC粉末；反应物经分离纯化、除菌过滤，得到成品。本发明的有益效果是：提高了合格结合物收率，降低了结合过程中的原料消耗，提高了生产工艺的稳定性和终产品质量的一致性。

主权项

一种制备b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的方法，其特征在于：它包括以下步骤：S1、多糖的凝胶过滤层析纯化，将Hib荚膜多糖用注射用水稀释成浓度为3～6 mg /ml的溶液，用孔径0.45μm的滤膜澄清过滤，滤液经Sepharose 4FF凝胶层析柱层析纯化，收集KD≤0.3的层析洗脱液，收集的洗脱液再用300KD超滤膜超滤浓缩至多糖浓度≥4mg/ml，即得大分子Hib荚膜多糖； S2、多糖‑TT结合物的制备，它包括以下子步骤：S21、将大分子Hib荚膜多糖溶液用注射用水稀释成2～4mg/ml 的溶液，向该溶液中加入CNBr 活化15～25分钟，加入的CNBr与多糖重量比为0.5～1:1；再加入己二酰肼进行10～20分钟衍化反应，加入的己二酰肼与多糖的重量比为3～5：1；反应物经300KD超滤膜反复用注射用水稀释、超滤浓缩，去掉残余CNBr，得到多糖‑AH衍生物；S22、在多糖‑AH衍生物溶液中加入TT溶液，加入的TT溶液与多糖‑AH 衍生物溶液体积比为1:1，加入的TT溶液中TT浓度与步骤S21中将大分子Hib荚膜多糖溶液用注射用水稀释成的溶液中多糖浓度的浓度比为1.5～2.5:1；混匀后置冰浴中，加入EDAC粉末至溶液中EDAC终浓度为18～22 mmol /L，在pH为4. 7±0. 2、温度为2～8℃的条件下反应1～2h；然后调节pH至7.0，在温度为2～8℃的条件下静置≥10小时；反应物经Sepharose 4FF凝胶柱分离纯化，收集KD≤0.2的洗脱液段，除菌过滤，得到成品。