[发明专利]一种超声辅助荧光染色检测微藻油脂含量的方法

摘要

一种超声辅助荧光染色检测微藻油脂含量的方法，它涉及快速检测微藻油脂含量的方法。本发明针对微藻藻种细胞壁较厚，荧光染料难以穿透其细胞壁和细胞膜与胞内脂质有效结合的技术难点。本方法将微藻液利用超声波进行处理后采用脂溶性染料尼罗红进行染色。所用的激发波长为530～540nm，发射波长为565～575nm，建立了相对荧光强度-油脂含量标准曲线，用于定量检测微藻细胞的油脂含量。本方法所需样品量少、灵敏度高、易于操作，可用于富油微藻的高通量筛选及胞内油脂含量的动态监测等。

主权项

一种超声辅助荧光染色检测微藻油脂含量的方法，其特征在于它是按下列步骤实现的：一、取微藻藻液，经离心收集固相物，加入等体积的去离子水或超纯水，得重悬微藻细胞，将其分成两份待用；二、将步骤一得到的一份重悬微藻细胞，在温度为0～4℃的条件下超声破碎1～30min；三、向步骤二超声破碎后的重悬微藻细胞中加入尼罗红混匀，避光染色1～30min，将染色后的微藻细胞分为两份；四、取步骤三中的一份染色后的微藻细胞，采用三维荧光光谱对步骤三染色后的微藻细胞测定荧光强度；五、取步骤三中另一份的染色后的微藻细胞，采用二维荧光光谱测定荧光强度，将染色后的微藻细胞二维荧光光谱所测定的荧光强度数值减去尼罗红和未进行尼罗红染色微藻细胞在二维荧光光谱相同波长下测得的荧光强度数值之和，即得相对荧光强度，然后取步骤一中的另一份重悬微藻细胞采用有机溶剂提取法测定油脂含量，构建相对荧光强度‑油脂含量标准曲线；六、根据标准曲线公式计算待测微藻的油脂含量；标准曲线公式为：y=0.0268x‑1.5532；其中，R2=0.9957，y为油脂含量，单位为mgL‑1；x为相对荧光强度；其中，步骤三中所述的尼罗红加入量为加入尼罗红至溶液中尼罗红的浓度为0.1～5.0mgL‑1；步骤四中所述的三维荧光光谱激发波长为220～750nm，发射波长为220～750nm；步骤五中所述的二维荧光光谱的激发波长为450～550nm，发射波长为500～700nm。