[发明专利]用分子印迹电化学发光传感器检测微量赤霉素A3的方法

摘要

本发明公开了一种用分子印迹电化学发光传感器检测微量赤霉素A3的方法。当待测分子赤霉素A3与电极表面的分子印迹膜上罗丹明B标记的赤霉素A3进行竞争取代时，罗丹明B在一定的电压下被氧化，形成氧化态的中间产物，该中间产物可以极大地诱导放大鲁米诺微弱的电化学发光信号，导致鲁米诺底液的电化学发光降低。罗丹明B与底液中的鲁米诺在金电极上的电化学发光强度变化与赤霉素A3的浓度在1.0×10-11~3.0×10-9mol/L浓度范围内呈良好的线性关系，方法检出限为3.45×10-12mol/L。本发明克服了已有技术在检测时存在过于复杂等诸多缺点，提高了灵敏度和选择性，对于低浓度赤霉素A3的检测易于自动化。

主权项

1.一种用分子印迹电化学发光传感器检测微量赤霉素A3的方法，其特征在于具体步骤为：（1）金电极的处理：依次用1.0、0.3和0.05μm氧化铝粉将金电极抛光后，分别在无水乙醇和水中各超声洗涤5分钟，然后在0.5mol/LH₂SO₄中于-0.2~1.0V进行循环伏安即CV电化学处理，直到获得稳定的CV响应；（2）赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器的制备：先将0.009~0.036g邻苯二胺用10mLpH=5.2的醋酸缓冲液溶解，然后加入2×10^-4~8×10^-4mol/L的赤霉素A3溶液，充分混合均匀，用循环伏安法扫描20~40圈，扫描范围-0.2~1.0V，扫速50mV/s；聚合完成后将金电极取出，用二次蒸馏水冲洗干净后，放入体积比为7~9:1的无水甲醇-冰醋酸体系中，在搅拌下洗涤金电极表面的聚合膜5~15分钟，除去聚合物膜中的赤霉素A3以及吸附在分子印迹膜上的其它吸附物，制成保留有模板分子构型孔穴的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器；（3）检测方法：首先将步骤(2)制得的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器置于罗丹明B标记的赤霉素A3的溶液中孵化18分钟，然后取出赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器冲洗表面；将孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器分别放入0、1×10^-11、3×10^-11、6×10^-11、12×10^-11、25×10^-11、50×10^-11、80×10^-11、120×10^-11、160×10^-11、200×10^-11、250×10^-11、300×10^-11mol/L的赤霉素A3标准溶液中进行竞争吸附10~20分钟；最后接入检测体系，检测体系为：10mL含1.2×10^-3mol/L鲁米诺的0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液，Tris-HCl缓冲溶液pH=7.8；用MPI-E型电致化学发光分析系统进行电致化学发光扫描，扫描电压-0.3~0.8V，扫速为100mV/s，光电倍增管高压900V，采样速率10T/S，放大倍数4，测量时间90s；（4）标准工作曲线的绘制：在15mL小烧杯中加入10mL含1.2×10^-3mol/L鲁米诺的0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液，Tris-HCl缓冲溶液pH=7.8；将已在罗丹明B标记赤霉素A3溶液中孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器浸入10mL赤霉素A3标准溶液中竞争吸附15分钟，进行电致化学发光检测；赤霉素A3在1.0×10^-11~3.0×10^-9mol/L浓度范围内与电化学发光强度减少值I_F呈良好的线性关系，线性方程分别为：I_F=11.51C(10^-11mol/L)+134.44，线性相关系数r=0.999；（5）样品中赤霉素A3含量的测定：在15mL小烧杯中加入10mL含1.2×10^-3mol/L鲁米诺的0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液，Tris-HCl缓冲溶液pH=7.8；将在罗丹明B标记赤霉素A3溶液中孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器浸入10mL赤霉素A3溶液中竞争吸附15分钟；利用电致化学发光分析系统对待测液进行电致化学发光扫描，扫描电压扫描电压-0.3~0.8V，扫速为100mV/s，光电倍增管高压900V，采样速率10T/S，放大倍数4，测量时间90s，得到电化学发光强度I_F；根据校正曲线计算出赤霉素A3的浓度C。