[发明专利]用分子印迹电化学发光传感器检测微量赤霉素A3的方法

权利要求书

1.一种用分子印迹电化学发光传感器检测微量赤霉素A3的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）金电极的处理：

依次用1.0、0.3和0.05μm氧化铝粉将金电极抛光后，分别在无水乙醇和水中各超声洗涤5分钟，然后在0.5 mol/L H₂SO₄中于-0.2 ~ 1.0 V进行循环伏安即CV电化学处理，直到获得稳定的CV响应；

（2）赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器的制备：

先将0.009 ~ 0.036g邻苯二胺用10 mLpH=5.2的醋酸缓冲液溶解，然后加入2×10^-4 ~ 8×10^-4 mol/L的赤霉素A3溶液，充分混合均匀，用循环伏安法扫描20 ~ 40圈，扫描范围-0.2 ~ 1.0V，扫速50 mV/s；聚合完成后将金电极取出，用二次蒸馏水冲洗干净后，放入体积比为7 ~ 9:1的无水甲醇-冰醋酸体系中，在搅拌下洗涤金电极表面的聚合膜5 ~ 15分钟，除去聚合物膜中的赤霉素A3以及吸附在分子印迹膜上的其它吸附物，制成保留有模板分子构型孔穴的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器；

（3）检测方法：

首先将步骤(2)制得的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器置于罗丹明B标记的赤霉素A3的溶液中孵化18分钟，然后取出赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器冲洗表面；将孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器分别放入0、1×10^-11、3×10^-11、6×10^-11、12×10^-11、25×10^-11、50×10^-11、80×10^-11、120×10^-11、160×10^-11、200×10^-11、250×10^-11、300×10^-11 mol/L的赤霉素A3标准溶液中进行竞争吸附10 ~ 20分钟；最后接入检测体系，检测体系为：10 mL 含1.2×10^-3 mol/L鲁米诺的0.05mol/L Tris-HCl缓冲溶液，Tris-HCl缓冲溶液pH=7.8；用MPI-E型电致化学发光分析系统进行电致化学发光扫描，扫描电压-0.3 ~ 0.8 V，扫速为100 mV/s，光电倍增管高压900 V，采样速率10 T/S，放大倍数4，测量时间90 s；

（4）标准工作曲线的绘制：

在15 mL小烧杯中加入10 mL含1.2×10^-3 mol/L鲁米诺的0.05 mol/L Tris-HCl缓冲溶液，Tris-HCl缓冲溶液pH=7.8；将已在罗丹明B标记赤霉素A3溶液中孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器浸入10 mL赤霉素A3标准溶液中竞争吸附15分钟，进行电致化学发光检测；赤霉素A3在1.0×10^-11 ~ 3.0×10^-9 mol/L浓度范围内与电化学发光强度减少值 ?I_F呈良好的线性关系，线性方程分别为：?I_F = 11.51 C (10^-11 mol/L) + 134.44，线性相关系数r =0.999；

（5）样品中赤霉素A3含量的测定：

在15 mL小烧杯中加入10 mL含1.2×10^-3 mol/L鲁米诺的0.05 mol/L Tris-HCl缓冲溶液，Tris-HCl缓冲溶液pH=7.8；将在罗丹明B标记赤霉素A3溶液中孵化完全的赤霉素A3分子印迹电化学发光传感器浸入10 mL赤霉素A3溶液中竞争吸附15分钟；利用电致化学发光分析系统对待测液进行电致化学发光扫描，扫描电压扫描电压-0.3 ~ 0.8 V，扫速为100 mV/s，光电倍增管高压900V，采样速率10 T/S，放大倍数4，测量时间90 s，得到电化学发光强度I_F；根据校正曲线计算出赤霉素A3的浓度C。