[发明专利]一种蚓激酶干粉制作工艺

摘要

本发明提供一种蚓激酶干粉制作工艺，其特征在于包括以下步骤：鲜蚓处理、制浆、除渣、盐析、离心、超滤、柱层析分离、浓缩和二次超滤、过滤和除菌，最后喷干制得的蚓激酶干粉。本发明与现有技术相比，优点在于本发明采用多次超滤和微孔过滤，能有效去除悬浮颗粒和小分子杂蛋白、核酸，杂菌等杂质，提高蚓激酶的纯度，进而获得纯度高、活性好的蚓激酶干粉；另外，整个制作过程各个环节相互紧凑，有效提高了中间介质的纯度和处理液的工作能力，且原料来源丰富、价格低廉，适合工业化生产。

主权项

一种蚓激酶干粉制作工艺，其特征在于包括以下步骤：1）鲜蚓处理：在地面或筐中将蚯蚓体表面的泥土层层除去，然后将蚯蚓铺成薄层，光照射10‑18h，使蚯蚓排出污物，再利用清洗机清洗蚯蚓表面的泥和粘浮物，塑料桶盛装经上述处理的蚯蚓，然后放入冷库中贮存备用；2）制浆：加入蚯蚓体积3‑5倍的浓度为0.1mol/L的乙醇柠檬酸钠缓冲液，利用胶体磨或高速组织均质机将清理过的蚯蚓进行细胞破碎，制成匀浆；3）除渣：将经步骤2）制得的匀浆经离心机离心去除粗渣，收集上清液；4）盐析：向经步骤3）处理收集的上清液中加入硫酸铵，利用搅拌机搅拌至完全溶解，使制得的饱和溶液中硫酸铵的质量分数为30%‑40%，然后静止放置1‑1.5h，制得饱和溶液；5)离心：利用高速离心机离心分离经步骤4）制得的饱和溶液，去除其中含有的细渣，得到澄清液；6）超滤：取经步骤5）处理得到的澄清液，采用50000dt的超滤膜超滤，得超滤液；7）柱层析分离：用泵将超滤液输送到下料桶，然后混合上样，待上样完毕，利用洗涤液洗涤流出液呈淡黄色，pH为7.0‑8.0，呈碱性之后，再用弱碱性液洗脱至洗脱液变浑浊，颜色由黄变红，流出液电导率高于洗脱液电导率时开始收集流出液，当流出液开始变澄清，颜色呈淡橙色，电导率达到洗脱液电导率时停止洗脱，得收集液；8）浓缩和二次超滤：将经步骤7）得到的收集液倒入贮存罐内，开启浓缩泵，调节转速为21×12rpm，调节压力小于等于0.1Mpa，浓缩至收集液体积为原来的1/14‑1/15，收集浓缩液按步骤6）进行超滤，超滤至澄清后上洗脱柱用去离子水脱盐，最后洗脱至浓缩液pH为7.0，体积为收集液体积的1/16‑1/20时止，得浓缩液；9）过滤和除菌：用澄清型和除菌型液净滤板过滤步骤8）制得的浓缩液2‑3遍，至滤液澄清，然后用0.22μm的微孔滤膜对滤液进行过滤灭菌，得料液成品；10）喷干：利用干燥塔，控制干燥塔出口温度为80‑86℃，干燥经上述步骤处理得到的料液成品，收集干燥后制得的蚓激酶干粉。