[发明专利]精子芯片

摘要

提供一种制备高通量男性不孕相关的人类精子芯片的技术和方法。收集5例已婚已育男性自愿捐精者、以及60例临床诊断为男性不孕（排除输精管阻塞等非精子缺陷因素）患者自愿捐精者的精液，待精液自然液化后收集固定精子细胞、脱水透明、浸蜡。利用组织芯片仪制备精子石蜡芯、精子石蜡块阵列，石蜡切片制备精子芯片。结合免疫组化、分子原位杂交等实验分子研究技术，所制备的精子芯片可用于导致人类男性不孕的精子基因或功能缺陷等的研究。

主权项

一种精子芯片的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：第一步，精液收集。收集已婚已育男性自愿捐精者以及男性不孕（排除输精管阻塞等非精子缺陷因素）患者自愿捐精的精液约1ml。第二步，精子固定。待精液自然液化后加入10倍精液体积的精子固定溶液，充分混匀，室温固定1小时。第三步，脱水包埋。离心收集精子，中性PBS缓冲液洗涤精子2次。酒精梯度脱水后，脱脂透明，离心收集处理好的精子。将精子加入50ul预热融化的石蜡中，混匀。冷却固定成精子石蜡块。第四步，精子蜡芯。利用组织芯片制备仪石蜡芯取样器，钻取直径为1mm的精子蜡芯。第五步，受体蜡模。制备空白石蜡块，利用组织芯片制备仪定位钻取孔径为1mm的空心受体蜡模，小阵列内孔间距为1mm。第六步，精子阵列。依照精子芯片的设计，将精子石蜡芯逐一安放到空心受体蜡模中相应的空白孔位点，以阵列表面齐平为基准。第七步，阵列融合。将精子阵列置于干燥箱中，调节干燥箱温度与时间，确保所有精子石蜡芯与受体蜡模充分融合且精子石蜡芯不移位变形。第八步，石蜡切片。利用石蜡切片机切片制作石蜡切片，片厚4um。将石蜡切片平铺与粘附载玻片上。在载玻片标记区域作好标记。