[发明专利]一种提高肝片吸虫Cat L1（FhCat L1）DNA疫苗免疫保护率的方法

摘要

一种提高肝片吸虫Cat L1（FhCat L1）DNA疫苗免疫保护率的方法，所述方法从提高其抗原在树突状细胞中的呈递作用入手，利用树突状细胞(DC)的表面分子的DEC-205的单链抗体scFvNLDC-145能靶向DC细胞的重要作用机理，提高Spragae-Dawley大鼠在免疫编码FhCat L1的DNA疫苗后对肝片吸虫感染的抵抗力，从而提高FhCat L1的DNA疫苗的免疫保护率。

主权项

一种提高肝片吸虫Cat L1（FhCat L1）DNA疫苗免疫保护率的方法，所述方法包括以下步骤：1）运用反转录聚合酶链式反应RT‑PCR扩增目的基因肝片吸虫Cat L1，将扩增得到的Cat L1基因回收后连接入pMD18‑T载体，获得pMD‑Cat L1（SEQ ID NO.2）；2）利用大肠杆菌工程菌（Escherichia coli）和真核细胞Cos7表达目的蛋白；3) 制备 Cat L1多克隆抗体4)纯化和鉴定目的蛋白5)设计合成单链抗体scFvNLDC‑145的核苷酸序列SEQ ID NO.1：用单链抗体片断scFvNLDC‑145序列，在其5'和3'分别加入CACC碱基和BamH I序列后进行全基因合成，合成片断命名为SF, 同时合成SF的isotype 序列；6)构建并鉴定编码scFvNLDC‑145及目的蛋白的真核表达质粒：将pVAX1和合成的SF进行体外连接后转化大肠杆菌TOP10，然后提取质粒进行鉴定，测序正确的阳性重组质粒pVAX1‑ SF及步骤1中获得的pMD‑Cat L1分别用BamH I酶切，回收到的目的片段以T4 DNA连接酶连接过夜，连接产物转化到感受态细胞JM109中，提取质粒并进行测序鉴定后获得pVAX1‑SF‑ Cat L1阳性质粒，pVAX1‑ SF‑Cat L1中SF‑Cat L1序列为SEQ ID NO.3；7)动物免疫及感染试验； 8)动物体液及细胞免疫评价；9)免疫保护率评价。