[发明专利]一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法无效
申请号: | 201210508803.9 | 申请日: | 2012-12-03 |
公开(公告)号: | CN103849649A | 公开(公告)日: | 2014-06-11 |
发明(设计)人: | 张辉;朱为民;朱龙英;万延慧;刘娜;田守波 | 申请(专利权)人: | 上海市农业科学院;上海科园种子有限公司 |
主分类号: | C12N15/83 | 分类号: | C12N15/83;C12N15/113;A01H5/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 201403 *** | 国省代码: | 上海;31 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明为一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法,其特征在于:利用病毒载体在番茄体内表达病毒序列而诱导番茄对病毒产生抗性,根据已经报道的TYLCV基因组序列,利用生物信息学软件(DNAStar,Madison,WI,USA)分析寻找其保守区段(ΔRep),设计引物,以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板,扩增克隆目的保守片段(约350nts)。将该片段反向重复插入TYLCV随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中,构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体TRV2-ΔRep,利用电击法导入农杆菌EHA105,浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片,从而使番茄获得对TYLCV的抗性。采用本发明的方法,可以快速使番茄获得对TYLCV的抗性,大大节约了传统育种的成本。 | ||
搜索关键词: | 一种 利用 病毒 载体 诱导 番茄 tylcv 方法 | ||
【主权项】:
一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法,其特征在于:利用病毒载体表达病毒序列从而诱导番茄对TYLCV产生抗性。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海市农业科学院;上海科园种子有限公司,未经上海市农业科学院;上海科园种子有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201210508803.9/,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:一种独体式空间绿化系统及其绿化方法
- 下一篇:一种诱导番茄耐热性的方法
- 同类专利
- 使用柑橘衰退病毒载体进行外源基因表达-201280056898.3
- 威廉·欧·多森;斯维特拉娜·弗里莫诺娃;卓阿·埃尔默塔 - 佛罗里达大学研究基金会有限公司
- 2012-09-21 - 2019-10-18 - C12N15/83
- 本发明揭示了基于对柑橘衰退病毒的修改、为有益目的用于转染柑橘树的病毒载体。本发明揭示了包括含有一个或多个编码异源性多肽的基因盒的病毒载体。所述基因盒位于病毒基因组上的理想位点,使得增加表达量的同时保存病毒的功能性。本发明同时揭示了用病毒载体转染植物的方法以及被病毒转染的植物的实施例。
- 鉴定牡丹类黄酮糖基转移酶基因的VIGS沉默体系-201710607382.8
- 舒庆艳;王亮生;朱瑾 - 中国科学院植物研究所
- 2017-07-24 - 2019-08-23 - C12N15/83
- 本发明公开了鉴定牡丹类黄酮糖基转移酶基因的VIGS沉默体系。本发明所提供的鉴定牡丹类黄酮糖基转移酶基因的VIGS沉默体系,包含:在VIGS沉默载体上插入目的基因得到的重组载体;所述目的基因为序列表中序列1所示核苷酸序列和/或序列表中序列3所示核苷酸序列。本发明利用同源克隆技术克隆了类黄酮糖基转移酶基因PsUF3GT和PsUF5GT保守区段作为靶基因构建TRV2载体,成功建立了VIGS沉默体系,有效地降低了这两个基因的表达量和总花青苷含量。本发明结果对牡丹基因功能研究具有重要意义,也为解析牡丹色斑形成的分子机制奠定了基础。
- 具有多功能的瞬时表达病毒载体体系-201510204207.5
- 多森·O.·威廉姆;弗里莫诺娃·斯维特拉娜 - 佛罗里达大学研究基金会有限公司
- 2011-04-08 - 2019-07-12 - C12N15/83
- 本申请揭示了适用于木本树木转染的病毒载体,主要用于传递和表达有益的基因。本申请具体说明的是用于感染柑橘属果树的载体。该载体可以表达有用的蛋白质,例如那些可以保护树木不受疾病伤害的蛋白质。本申请具体说明的是转染木本树木的方法,可以在避免双重感染的同时实现载体的多样化应用。
- 一种以棉花幼胚为受体接种TRV病毒诱导基因沉默方法-201610157678.X
- 张景霞;张军;王芙蓉;陈煜;张传云;刘国栋 - 山东棉花研究中心
- 2016-03-17 - 2019-05-28 - C12N15/83
- 本发明涉及一种以棉花幼胚为受体接种TRV病毒诱导内源基因沉默的方法,步骤如下:(1)将目的基因插入TRV病毒载体中,制备重组载体,然后转化农杆菌,制得转化后的农杆菌;(2)取棉花种子,经脱绒、灭菌后,经萌发后去除萌发种子的内、外皮,幼胚放入含有赤霉素的MS液体培养基中,制得待侵染胚;(3)培养转化后的农杆菌,制得农杆菌侵染液,制得侵染液,将待侵染胚浸入侵染液中,暗培养,经共培养后,栽种到灭菌的营养土中,进行营养土培养,即可。本发明首次以棉花幼胚作为受体接种TRV病毒,不对幼胚进行破坏性处理,不产生任何损伤,克服了接种病毒时对棉苗造成机械损伤的缺点。
- 一种植物多分体病毒载体的开发和应用-201811547209.4
- 王颖;姜宁;张超;张宗英;韩成贵;于嘉林;李大伟;王献兵;张永亮 - 中国农业大学
- 2018-12-18 - 2019-04-12 - C12N15/83
- 本发明公开了一种植物多分体病毒载体的开发和应用。本发明提供了成套重组病毒载体,包括表达BN1的重组载体和表达BN2的重组载体;所述表达BN1的重组载体为将BNYVV基因组的RNA1全长CDNA序列替换双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体,表达BNYVV病毒的RNA1;所述表达BN2的重组载体为将BNYVV基因组的RNA2全长CDNA序列替换所述双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体,表达BNYVV病毒的RNA2。本发明采用的多分体病毒表达载体能在植物同一个细胞内同时表达多个蛋白;在植物体内表达量比较高,周期短,并且可以系统侵染。
- 一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法-201510371509.1
- 李正和;马晓楠;王强;钱莎莎;孙凯;周雪平 - 浙江大学
- 2015-06-30 - 2018-04-27 - C12N15/83
- 本发明公开了一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法。重组植物弹状病毒载体,包括a)一个修饰的植物弹状病毒基因组;b)一个新引入的转录单元,它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列;c)一个异源核酸序列,它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元,其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力,所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白。本发明病毒表达载体是第一个能在植物上表达外源蛋白的负义RNA病毒载体,具有表达量高,表达稳定性好,可以插入较长的外源基因片段,且插入的外源基因片段不易丢失等方面的特点,可以用于表达多种外源蛋白,也可以用于制备动物疫苗,具有广阔的应用价值和应用前景。
- 一种同时沉默烟草植物中2个目的基因的方法-201710240479.X
- 朱峰;周杨开;钱坤;纪兆林;车燕萍 - 扬州大学
- 2017-04-13 - 2017-08-18 - C12N15/83
- 本发明一种同时沉默烟草植物中2个目的基因的方法。该方法分别采用NbSABP2和NbNAC1基因的特异引物扩增出NbSABP2和NbNAC1基因片段,再获得(NbSABP2+NbNAC1)片段,将该片段连接到克隆载体上后转化到大肠杆菌中获得重组质粒,再进一步构建病毒重组质粒、转化农杆菌、侵染烟草。采用本发明的方法,结果表明NbSABP2和NbNAC1基因的表达显著降低。实现了同时沉默烟草植物中2个目的基因。
- 用重组大麦条斑花叶病毒载体介导的小麦靶标miRNA过表达方法-201710046709.9
- 赵惠贤;简超;韩冉 - 西北农林科技大学
- 2017-01-22 - 2017-06-13 - C12N15/83
- 本发明公开了一种用重组大麦条斑花叶病毒(BSMV)介导的小麦靶miRNA过表达方法,主要通过用携带靶miRNA前体片段的重组BSMV的α、β、γcDNA体外转录物等量混合后接种小麦3‑5叶期幼苗完全展开新叶或扬花期小麦穗部,实现小麦内源靶miRNA过表达。相对于现有的基于转基因的小麦miRNA过表达技术方法,其具有简单、快速、准确、可重复性好的特点。
- 鉴定紫花苜蓿MsPDS基因的VIGS沉默体系及其构建和鉴定方法-201610574687.9
- 王赞;龚攀;刘希强;王学敏;高洪文 - 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
- 2016-07-19 - 2016-12-07 - C12N15/83
- 本发明公开一种鉴定紫花苜蓿MsPDS基因的VIGS沉默体系、应用及鉴定方法,涉及生物技术领域,所述VIGS沉默体系具有如SEQ ID NO.1所示的基因序列,是利用加入了酶切位点的特异性引物扩增的紫花苜蓿cDNA片段及VIGS病毒载体进行重组后得到。本发明构建的沉默体系不但可以在植株内发生繁殖传播,而且沉默效果显著。
- 弱毒力CMV载体表达抗性基因增强植物抗除草剂性能的应用-201610256085.9
- 竺锡武;彭日民;王强;张媛媛;吴娟 - 湖南人文科技学院
- 2016-04-22 - 2016-09-07 - C12N15/83
- 本发明公开了一种黄瓜花叶病毒弱毒力载体表达抗除草剂基因在增强植物抗除草剂性能方面的应用。黄瓜花叶病毒弱毒力载体的构建方法包括如下步骤:1)、改造病毒CMV成缺失2b基因序列的弱病毒表达载体;具体为:将已构建好的病毒CMV侵染性克隆质粒之一pCB‑CMVF209采用酶切连接的方法改造,使2b基因缺失,并加入酶切位点,构建成为弱毒力的病毒表达载体‑‑‑弱病毒载体;2)、将抗除草剂基因编码区(ORF)序列插入步骤1)所得的弱病毒载体构建重组病毒表达载体;构建所得的含抗除草剂基因编码区序列的重组弱病毒表达载体用于增强植物对除草剂的抗性。
- 弱毒力CMV载体在表达抗虫基因增强植物抗虫性方面的应用-201610257242.8
- 竺锡武;吴娟;王强;刘津;李晓超;王青;陈亚妮 - 湖南人文科技学院
- 2016-04-22 - 2016-08-31 - C12N15/83
- 本发明公开了一种黄瓜花叶病毒弱毒力载体在增强植物抗虫性能方面的应用。所述黄瓜花叶病毒弱毒力载体的构建方法包括如下步骤:1)、改造病毒CMV成缺失2b基因序列的弱病毒表达载体;具体为:将已构建好的病毒CMV侵染性克隆质粒之一pCB‑CMVF209采用酶切连接的方法改造,使2b基因缺失,并加入酶切位点,构建成为弱毒力的病毒表达载体‑‑‑弱病毒载体;2)、将抗虫基因编码区(ORF)序列插入步骤1)所得的弱病毒载体构建重组弱病毒表达载体;构建所得的含抗虫基因编码区序列的重组弱病毒表达载体用于增强植物对害虫的抗性。
- 植物病毒表达载体及其用于在植物基因组中产生遗传型变异的用途-201410331456.6
- A.瓦因斯坦;A.朱克 - 丹齐格创新有限公司;耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司
- 2009-04-21 - 2015-01-07 - C12N15/83
- 本发明公开了在植物基因组中产生遗传型变异的方法。该方法包括将至少一种病毒表达载体引入植物中,所述的病毒表达载体编码至少一种包含DNA结合结构域、核酸酶以及定位至含DNA细胞器的定位信号的嵌合核酸酶,其中该DNA结合结构域介导该核酸酶特异性地靶向植物基因组,由此在植物基因组中产生遗传型变异。
- 一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法-201210508803.9
- 张辉;朱为民;朱龙英;万延慧;刘娜;田守波 - 上海市农业科学院;上海科园种子有限公司
- 2012-12-03 - 2014-06-11 - C12N15/83
- 本发明为一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法,其特征在于:利用病毒载体在番茄体内表达病毒序列而诱导番茄对病毒产生抗性,根据已经报道的TYLCV基因组序列,利用生物信息学软件(DNAStar,Madison,WI,USA)分析寻找其保守区段(ΔRep),设计引物,以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板,扩增克隆目的保守片段(约350nts)。将该片段反向重复插入TYLCV随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中,构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体TRV2-ΔRep,利用电击法导入农杆菌EHA105,浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片,从而使番茄获得对TYLCV的抗性。采用本发明的方法,可以快速使番茄获得对TYLCV的抗性,大大节约了传统育种的成本。
- 一种诱导番茄耐热性的方法-201210508785.4
- 张辉;朱为民;朱龙英;万延慧;刘娜;田守波 - 上海市农业科学院;上海科园种子有限公司
- 2012-12-03 - 2014-06-11 - C12N15/83
- 本发明为一种诱导番茄耐热性的方法,其特征在于:利用PVX载体在番茄体内表达耐热相关基因LeMPK而诱导番茄对病毒产生抗性,根据已经报道的LeMPK基因组序列,利用生物信息学软件(DNAStar,Madison,WI,USA)分析其序列,设计引物,以番茄叶片总DNA为模板,扩增克隆该基因。将该基因序列克隆至病毒载体PVX中,构建表达LeMPK基因的病毒,利用电击法将该载体导入农杆菌EHA105,浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片,从而使番茄获得耐热性。采用本发明的方法,可以提高番茄对高温的耐受性。
- 一种使用病毒诱导的基因沉默系统培育雄性不育植株的方法-201310634133.X
- 张洪博;王文静;李加纳;杨小川;马浩然 - 西南大学
- 2013-11-29 - 2014-05-28 - C12N15/83
- 本发明提供了VIGS载体系统在培育双子叶雄性不育植株中的应用。本发明建立了一个基于VIGS技术的高效实用的植物不育株系创建技术体系,不育率超过了96%,可达到98%,且具有不稳定遗传的特点,不会在后代中遗传,不会发生因不可控生物技术扩散而引起的基因污染或生物安全。同时,本发明操作简单,时间短,田间工作量少,大大节约成本,提高育种效率。
- 使用腺相关病毒(AAV)载体递送蛋白-201280019807.9
- 亚历杭德罗·本杰明·巴拉兹;大卫·巴尔的摩 - 加州理工学院
- 2012-02-21 - 2014-01-01 - C12N15/83
- 本文公开了用于使用腺相关病毒(AAV)载体递送感兴趣的蛋白的组合物、系统和方法。公开了包括5’和3’反向重复序列(ITR)、启动子、用于多核苷酸的插入的限制性酶切位点和转录后调节元件的AAV载体。还公开了AAV载体用于表达中和抗体的用途。
- 具有多功能的瞬时表达病毒载体体系-201180027897.1
- 多森·O.·威廉姆;弗里莫诺娃·斯维特拉娜 - 佛罗里达大学研究基金会有限公司
- 2011-04-08 - 2013-02-13 - C12N15/83
- 本申请揭示了适用于木本树木转染的病毒载体,主要用于传递和表达有益的基因。本申请具体说明的是用于感染柑橘属果树的载体。该载体可以表达有用的蛋白质,例如那些可以保护树木不受疾病伤害的蛋白质。本申请具体说明的是转染木本树木的方法,可以在避免双重感染的同时实现载体的多样化应用。
- 用于棉花中基因功能性分析的病毒诱导的基因沉默(VIGS)-201080035446.8
- 叶健;蔡南海;曲景;Y·F·耿;Y·P·步 - 淡马锡生命科学研究院有限公司
- 2010-06-10 - 2012-11-28 - C12N15/83
- 本发明涉及采用病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法对棉花基因进行功能性分析。更具体地,本发明借助于烟草脆裂病毒(TRV)载体RNA1和RNA2在棉花中诱导基因沉默,并可分析对棉花植物表型的影响。此外,本发明还提供瞬时表达载体TRV RNA2,以便在强亚基因组启动子的影响下在棉花植物和植物组织中瞬时表达基因。
- 利用植物病毒载体进行miRNA靶标模拟序列构建和表达的方法-201210174886.2
- 刘玉乐;汤旸;沙爱华 - 清华大学
- 2012-05-30 - 2012-10-03 - C12N15/83
- 本发明公开了利用植物病毒载体进行miRNA靶标模拟序列构建和表达的方法。实验证明,化学合成编码miRNA158或miRNA172靶标模拟序列的DNA分子插入植物病毒表达载体pTY102得到的重组表达载体再导入烟草叶片中,3周后即可检测到烟草的表型变化和miRNA靶标基因表达量的升高。本发明不需进行搭桥PCR,方法简单;本发明利用了病毒所具有的表达量高、寄主范围广及在整株植物上扩散快速的特点,可快速和方便的降低植物内源miRNA的表达水平,为研究植物内源miRNA功能提供了一个新的途径。
- 植物中有害动物的防治-201080053979.9
- 叶健;蔡南海;曲景;S-Q·高 - 淡马锡生命科学研究院有限公司
- 2010-09-15 - 2012-08-22 - C12N15/83
- 本发明涉及使用在宿主中表达有害动物基因的病毒来防治有害动物(诸如昆虫)的领域。更具体地,本发明涉及一种快速筛选有害动物基因的方法,当有害动物摄入表达与病毒连接的有害动物基因序列的宿主组织时,所述有害动物基因可以导致有害动物死亡。本发明还涉及一种防治有害动物的方法,通过靶标有害动物序列的病毒表达来改变有害动物基因在有害动物细胞或组织中的内源表达。
- 用重组大麦条斑花叶病毒介导的小麦穗部和籽粒靶标基因沉默方法-201110450603.8
- 赵惠贤;马猛 - 西北农林科技大学
- 2011-12-20 - 2012-07-04 - C12N15/83
- 本发明涉及一种用重组大麦条斑花叶病毒(BSMV)介导的小麦穗部和籽粒靶标基因沉默的方法,主要通过用携带靶标基因片段的重组BSMV的α、β、γcDNA体外转录物等量混合后接种抽穗期~扬花期小麦穗,实现穗部和种子靶标基因表达的沉默。相对于现有的基于转基因的小麦穗部和种子RNAi技术方法,其具有简单、快速、准确、可重复性好的特点。
- 麻风树基因的功能分析-200980154211.8
- 叶健;蔡南海;曲景 - 淡马锡生命科学研究院有限公司
- 2009-12-16 - 2011-12-07 - C12N15/83
- 本发明涉及基因组规模的麻风树属基因功能分析领域。更具体地,本发明涉及一种利用病毒诱导性基因沉默来进行基因组规模的麻风树基因高通量功能分析的方法。所述方法涉及烟草脆裂病毒(TRV)的用途。
- 一种调控百合花期的方法-201010263567.X
- 张秀海;任霞;李双;黄丛林;吴忠义 - 北京农业生物技术研究中心
- 2010-08-26 - 2011-04-20 - C12N15/83
- 本发明提供一种调控百合花期的方法,该方法是利用病毒表达载体将拟南芥的FT基因(Genbank中登陆号为NM105222.2)导入百合中;所述的百合的品种为新铁炮富田1号。所述的病毒表达载体由电击转化法导入农杆菌,得到带有所述的病毒表达载体的农杆菌;再将所述的带有病毒表达载体的农杆菌注射入百合小苗的叶片中。所述的病毒表达载体由质粒载体pGR106构建而成。所述的农杆菌的菌种为GV3101。本发明的利用FT蛋白可以长途运输的性质,由产生部位运输到靶标部位最终促进成花;本发明在处理中没有对植株使用激素,也未涉及到转基因植物,所以没有造成化学药品所带来的环境污染;本发明的处理过程简单易行、处理后植株养护方便、催化成本低廉。
- 在豌豆中瞬时表达外源蛋白的发芽种子真空侵染法-200810051444.2
- 王兴智;朱筱娟;范亚军;李伟 - 东北师范大学
- 2008-11-20 - 2009-06-17 - C12N15/83
- 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及在豌豆中瞬时表达外源蛋白的发芽种子真空侵染法 首先,建立发芽种子真空侵染法并进行优化,选择根长2-3厘米的豌豆种子为侵染材料,以绿色荧光蛋白GFP为报告基因对真空时间、真空压力及菌液浓度进行优化得到表达外源蛋白的最适条件。然后进行人源酸性成纤维细胞生长因子植物病毒表达载体的构建,将编码人源酸性成纤维细胞生长因子DNA序列连入改造的植物病毒表达载体,转入农杆菌GV3101中用于在植物中瞬时表达。在最佳条件下侵染豌豆发芽种子,侵染后12-14天收获外源蛋白。本发明周期短、易操作、成本低、无污染,可以方便、快捷在豌豆中大量瞬时表达外源蛋白。
- 一种病毒诱导的基因沉默系统及其应用-200810041437.4
- 许政暟;李茫茫;贺燕云;金菲;李平;宋任涛 - 上海大学
- 2008-08-07 - 2009-04-29 - C12N15/83
- 本发明涉及一种特别是一种以烟草花叶病毒TMV为载体的病毒诱导的基因沉默系统。该系统是将目标基因DNA片段插入到烟草花叶病毒TMV外壳蛋白CP的终止密码子与3’非翻译区之间,并在烟草花叶病毒TMV外壳蛋白CP的终止密码子与3’非翻译区之间引入了多克隆限制性内切酶切位点,用于目标基因DNA片段的插入;在3’非翻译区前引入一段CP 3’末端的碱基序列,以增强沉默载体的稳定性。所述的目标基因DNA片段不大于1kb。利用本发明的基因沉默系统对目标基因进行沉默将更为经济可行、方便、有效。
- 专利分类