[发明专利]荷叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物及用途

摘要

本发明提供一种荷叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，通过磁珠分离和液相色谱-质谱联用分析方法从荷叶中筛选获得9个具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，经过α-葡萄糖苷酶抑制活性验证，确认获得的化合物具有α-葡萄糖苷酶抑制活性。与传统方法相比，初筛无须制备分离化合物，显著提高了筛选效率、缩短了筛选时间。将先分离后筛选的传统活性筛选模式改进为先筛选鉴定后分离的新型活性筛选模式，大大减少了化合物制备分离的盲目性。可推广应用于天然药物或中药混合物中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物的快速筛选。获得的化合物可在制备抗糖尿病药物中应用。

主权项

一种荷叶中具α‑葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）制备键合α‑葡萄糖苷酶的磁珠（a）磁珠活化：取磁珠使用2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸溶液清洗后加入1‑乙基‑3‑(3‑二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N‑羟基琥珀酰亚胺溶液混合均匀，孵育活化30min后移去上清液，并用2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸溶液清洗；（b）磁珠键合：在活化的磁珠上，加入含α‑葡萄糖苷酶的2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸溶液，震荡混合均匀，在室温孵育30min进行包被，移去上清液，再用磷酸缓冲液清洗包被的磁珠，弃去清洗液，待用；（c）键合磁珠质量考察：将制备的键合磁珠分散在磷酸缓冲液中，使用扫描式电子显微镜对空白磁珠、α‑葡萄糖苷酶键合磁珠的表面分别分析，检查磁珠键合情况，采用傅里叶变换红外光谱仪，测定空白磁珠、α‑葡萄糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶键合磁珠的红外光谱，检查酶结合情况，采用磁强计数仪考察键合磁珠的磁力变化情况；（2）筛选具α‑葡萄糖苷酶抑制活性的化合物（a）具α‑葡萄糖苷酶抑制活性的化合物初筛：取100 μl荷叶提取物水溶液2份，分别加到1ml 分散于醋酸铵溶液的键合α‑葡萄糖苷酶的磁珠和空白磁珠，分别放在振荡器上混匀，孵育1 h，弃去上清液，用醋酸铵溶液清洗，最后用含10%乙腈的醋酸铵溶液洗脱，取空白磁珠和酶键合磁珠的洗脱液进行液相色谱‑质谱联用分析；（b）目标化合物获取及活性验证：采用常规柱色谱分离技术分离获取目标化合物群，再采用制备液相色谱分离、纯化目标化合物或购置目标化合物标准品；采用酶抑制活性实验验证纯化的目标化合物是否具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性，计算其半数抑制浓度。