[发明专利]荷叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物及用途

权利要求书

1.一种荷叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）制备键合α-葡萄糖苷酶的磁珠

（a）磁珠活化：取磁珠使用2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液清洗后加入1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合均匀，孵育活化30min后移去上清液，并用2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液清洗；

（b）磁珠键合：在活化的磁珠上，加入含α-葡萄糖苷酶的2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液，震荡混合均匀，在室温孵育30min进行包被，移去上清液，再用磷酸缓冲液清洗包被的磁珠，弃去清洗液，待用；

（c）键合磁珠质量考察：将制备的键合磁珠分散在磷酸缓冲液中，使用扫描式电子显微镜对空白磁珠、α-葡萄糖苷酶键合磁珠的表面分别分析，检查磁珠键合情况，采用傅里叶变换红外光谱仪，测定空白磁珠、α-葡萄糖苷酶、α-葡萄糖苷酶键合磁珠的红外光谱，检查酶结合情况，采用磁强计数仪考察键合磁珠的磁力变化情况；

（2）筛选具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物

（a）具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物初筛：取100 μl荷叶提取物水溶液2份，分别加到1ml 分散于醋酸铵溶液的键合α-葡萄糖苷酶的磁珠和空白磁珠，分别放在振荡器上混匀，孵育1 h，弃去上清液，用醋酸铵溶液清洗，最后用含10%乙腈的醋酸铵溶液洗脱，取空白磁珠和酶键合磁珠的洗脱液进行液相色谱-质谱联用分析；

（b）目标化合物获取及活性验证：采用常规柱色谱分离技术分离获取目标化合物群，再采用制备液相色谱分离、纯化目标化合物或购置目标化合物标准品；采用酶抑制活性实验验证纯化的目标化合物是否具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，计算其半数抑制浓度。

2.根据权利要求1所述的一种荷叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，其特征在于，所述化合物有槲皮素 3-O-阿拉伯糖基-(1→2)-半乳糖苷、芦丁、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-鼠李糖基-(1→6)-葡萄糖苷(水仙苷)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、异鼠李素-3-O-β-D-木糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和槲皮素。

3.根据权利要求1或2所述的一种荷叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物在制备抗糖尿病药物中的应用。