[发明专利]一种制备天冬氨酸氨基转移酶的方法及应用

摘要

本发明公开了一种制备天冬氨酸氨基转移酶的方法及应用，该方法包括：改造全基因合成人源化天冬氨酸氨基转移酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；将改造后的天冬氨酸氨基转移酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；所得菌体破菌，离心分离，过Ni-NTA柱纯化；本发明制备天冬氨酸氨基转移酶操作非常简单，制备成本低，成品产率高，纯度高而且具有高生物活性，作为抗原物质可进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为尽快建立国内临床化学诊断急需的校准品制备平台，研制诊断试剂标准物质和参考品奠定基础。

主权项

一种制备天冬氨酸氨基转移酶的方法，其特征在于，该方法包括:1）改造全基因合成人源化天冬氨酸氨基转移酶编码基因序列，去除大肠杆菌稀有密码子；2）将步骤1）中改造后的天冬氨酸氨基转移酶编码基因序列插入表达载体中，并用大肠杆菌菌株转化表达；3）将转化表达菌株接种于LB培养基，IPTG诱导；4）所得菌体破菌，离心分离，过Ni‑NTA柱纯化；其中，步骤1）中改造后的全基因合成人源化天冬氨酸氨基转移酶编码基因序列为：atggctctgc tgcattctgg tcgtgtactg cctggtattg ctgctgcatt ccacccgggcctggccgcgg cggcttctgc acgtgcatcc tcctggtgga ctcatgtaga aatgggtccgccagatccga tcctgggtgt taccgaggcg ttcaaacgcg ataccaattc caagaagatgaacctgggtg tgggcgcgta ccgtgacgac aatggcaaac cttacgtact gccatctgtgcgtaaagcag aagcgcaaat cgcggctaaa aacctggaca aagaatatct gccaatcggcggcctggcgg aattttgtaa agcttctgcg gaactggcgc tgggtgaaaa cagcgaagtgctgaaaagcg gtcgtttcgt taccgtacag actatctctg gtaccggtgc tctgcgcattggtgcttctt ttctgcaacg tttcttcaaa ttctctcgtg acgtgttcct gccgaagccgacgtggggca accacacccc gatttttcgc gatgcgggca tgcaactgca aggttaccgctactatgatc cgaaaacttg cggcttcgac tttactggcg ccgtggaaga catctccaagatcccggaac agagcgttct gctgctgcac gcatgtgctc ataacccaac tggcgtagacccgcgtccgg aacagtggaa agaaattgct accgttgtaa agaaacgtaa cctgttcgctttcttcgaca tggcctacca gggcttcgcg tctggtgacg gtgataagga cgcgtgggcggttcgccact tcattgaaca aggtatcaat gtatgtctgt gccagagcta cgccaaaaacatgggcctgt acggcgaacg tgtgggcgcc ttcaccatgg tttgcaaaga tgctgatgaggctaaacgtg tggaatctca gctgaaaatt ctgatccgcc cgatgtacag caacccacctctgaacggcg ctcgtattgc ggctgccatt ctgaacaccc cggacctgcg taaacagtggctgcaggagg taaaagttat ggctgatcgt atcattggta tgcgtactca gctggtttctaacctgaaga aggaaggctc cacccataac tggcagcata tcaccgatca gatcggcatgttctgtttca cgggtctgaa accggagcag gtggagcgtc tgatcaaaga gtttagcatttatatgacca aggatggccg tatcagcgta gcaggtgtta cctccagcaa cgttggctatctggctcatg ctatccatca agtaaccaag tag