[发明专利]一种测定生鲜冷却牛肉中生物胺的方法

摘要

本发明属于分析化学领域，公开了一种测定生鲜冷却牛肉中生物胺的方法。牛肉经三氯乙酸提取和混合型阳离子交换固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛肉中6种常见生物胺（尸胺，酪胺，色胺，腐胺，组胺，苯乙胺）。色谱部分采用亲水作用色谱柱，水-乙腈梯度洗脱；质谱部分采用电喷雾离子源正离子模式，多反应监测模式，外标法进行质谱定量分析。本方法分析时间仅需15min，且在0-1.0mg/L范围内线性良好（r＞0.994），检出下限为10μg/kg，平均回收率82.4％-116.7％，标准偏差5.3％-8.7％。本方法操作简便、快速准确，为生鲜冷却牛肉中生物胺的测定提供了一种方便快速的方法。

主权项

一种生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，步骤包括：I.前处理（1）提取：取牛肉样品与三氯乙酸水溶液混合匀浆后提取2～3次，离心取上清液，合并得到上清液III；用正己烷萃取，取下层液体即为样品提取液；（2）净化：步骤（1）的样品提取液过混合型阳离子交换固相萃取柱，洗脱后取洗脱液干燥，溶解于乙腈甲醇溶液，并过滤；具体步骤为，混合型阳离子交换固相萃取柱活化后，取步骤（1）的样品提取液上柱，用水和醇依次洗涤后用氨水甲醇溶液洗脱；洗脱液吹干后加入乙腈甲醇溶液混合均匀，过滤；氨水甲醇溶液中，氨的体积浓度为4%～6%；II.HPLC‑MS/MS测定（A）色谱条件为：亲水作用色谱柱；流速：0.15～0.3mL/min；进样量：8～12μL；分析时间：12～15min；柱温：34～36℃；A相为水相，水相为乙酸铵和甲酸的水溶液，其中乙酸铵含量1.5～2.5mmol/L,甲酸含量0.05wt%～0.15wt%，B相为乙腈；梯度洗脱条件：水相的体积百分比变化为：0～5min，30%匀速变为60%；5～8min为洗脱，60%；8～8.1min，由60%变为30%；8.1～15min为平衡，水相30%；（B）质谱条件：离子源温度116～122℃，脱溶剂温度295～310℃；脱溶剂气和锥孔气N2，脱溶剂气流速450～520L/h，锥孔气流速48～53L/h，碰撞气体为氩气；毛细管电压为2.80～3.20kV；扫描方式为正离子扫描，驻留时间45～60ms。