[发明专利]血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法

摘要

本发明公开了血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法，包括步骤是：用电化学刻蚀法刻蚀多孔硅，超声破碎；离心干燥得到多孔硅颗粒；将多孔硅颗粒制备成可以选择性捕获蛋白质的筛分材料；将筛分材料加入待检血清中，低温振荡吸附静置，将多孔硅颗粒分离；用PB缓冲液和去离子水清洗后，直接滴到MALDI靶上，室温干燥；然后将有机基质溶液点覆在多孔硅颗粒上，室温自然干燥后将制备好的样品送入MALDI-TOF质谱仪检测；根据质谱结果经数据统计处理后进行分层聚类分析，通过分析结果判断患者的病情。本发明提供了一种操作简单，灵敏度高，重现性好的血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法。

主权项

血清中低丰度低分子量蛋白的分析方法，包括以下步骤：a、根据目标蛋白分子量的大小和溶液组成，用电化学刻蚀法刻蚀一定孔径的多孔硅，将刻蚀后的多孔层从硅基底上剥离下来，进行超声破碎；超声破碎后的悬浊液经过离心干燥后，得到未经修饰的多孔硅颗粒；b、用化学修饰法对步骤a中得到的多孔硅颗粒进行修饰，制备成可以选择性捕获蛋白质的筛分材料，使其对不同等电点的蛋白质具有特异性的捕获能力；c、将步骤b中得到的筛分材料3 mg加入到50 uL待检血清中，低温进行振荡吸附0.5~1 h，充分作用后静置，利用多孔硅颗粒的自然沉降作用将富集了低分子量蛋白的多孔硅颗粒从溶液中分离出来；d、从溶液中分离出的多孔硅颗粒分别用0.2 mmol·L‑1的PB缓冲液和去离子水清洗，去除表面吸附的高丰度蛋白和盐类后，直接滴到MALDI靶上，室温干燥；然后将1 uL有机基质溶液（2‑氰基‑4‑羟基肉桂酸，α‑CHCA）点覆在多孔硅颗粒上，室温自然干燥后将制备好的样品送入MALDI‑TOF质谱仪检测； e、根据质谱结果经数据统计处理后进行分层聚类分析，通过分析结果判断患者的病情。