[发明专利]转基因大豆分子标准样品、其建立方法及应用

摘要

本发明公开一种转基因大豆GTS 40-3-2的标准样品制备、其建立方法及其在检测转基因大豆中的应用，以转基因大豆GTS 40-3-2为原料，确定其品系特异性目标基因，即转基因大豆GTS 40-3-2品系特异性基因和大豆内源Lectin基因，将两个目标DNA片段构建在载体pMD19-T上，并将阳性质粒用Hind-III酶进行线性化处理，最后按310pg/mL定量分装；通过上述方法获得转基因大豆GTS 40-3-2的标准样品，也可以应用于转基因大豆Real-Time PCR检测试剂盒。这对深入研究转基因成分检测标准样品的制备技术和稳定性保证技术，开展转基因产品检测标准样品的研制具有现实意义。

主权项

一种转基因大豆GTS 40‑3‑2标准样品，其特征在于，其按照如下方法制备：①以转基因大豆GTS 40‑3‑2的基因组为模板，分别以SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5为引物，PCR扩增，得到两个目的片段；PCR扩增条件：94℃预变性3.0min；94℃变性0.4min，55℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环；72℃ 5min；②将步骤①扩增的两个目的片段通过人工合成连接在一起之后，再连入质粒载体pMD19‑T中；并转化至JM109感受态细胞中，获得重组菌株；③将步骤②获得的重组菌株提取质粒，进行测序鉴定，鉴定结果以碱基序列中包含序列SEQ ID NO：7的质粒所对应的重组菌株为阳性菌株；④大量提取步骤③所述阳性菌株的质粒，用Hind‑III限制性内切酶进行线性化后分装，获得转基因大豆GTS 40‑3‑2标准样品。