[发明专利]快速提取大量样品微量DNA的方法及其在利用SSR标记鉴定作物杂交种纯度上的应用无效
| 申请号： | 201210153442.0 | 申请日： | 2012-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN102676504A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 王玉刚;冯辉;李承彧;刘志勇;冀瑞琴;聂子静;薛一花 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 沈阳科威专利代理有限责任公司 21101 | 代理人： | 张述学 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开一种快速提取大量样品微量DNA的方法及其利用SSR标记鉴定作物杂交种纯度上的应用，适于多种作物杂交种纯度鉴定。在进行PCR扩增试验时，直接利用10ul排枪进行操作，省去分装DNA过程，方便易行，提高效率，能短时间提取大量样品的微量DNA，本发明所提取的DNA直接用于PCR扩增，具有操作简单、快速、药品用量少、成本低等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 快速 提取 大量 样品 微量 dna 方法 及其 利用 ssr 标记 鉴定 作物 杂交种 纯度 应用 | ||
【主权项】：
一种快速提取大量样品微量DNA的方法，其特征是包括如下步骤：1）取深孔板1个，每孔加1‑1.5克石英砂，再加入1个直径3mm 的小钢珠球，将幼叶或根尖放入深孔板的每个孔中，利用排枪向每孔中加入CTAB提取液100ul，盖上板盖，进行研磨，每秒25‑30次，研磨2‑3分钟；2）65℃水浴10 min，水浴后1500 r/min 离心1min，然后加入100ul的氯仿和异戊醇混合液，混合液的两者体积比24：1，盖上板盖，轻轻混匀； 3）4000 r/min离心10 min，取上清液30ul，转移至新的普通PCR板中，加入20ul在‑20℃下预冷的异丙醇，盖上PCR板板盖；4）4000 r/min离心10 min，快速翻转PCR板，倾倒试管中的全部液体，将试管板在多层干燥的吸水纸上不同的位置吸湿2‑3 次，以吸去多余的液体；晾干后，加入30ul的TE溶液，‑4℃保存备用即可。
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