[发明专利]一种基于SNPs标记的牛肉DNA溯源方法

摘要

本发明涉及一种基于SNPs标记的牛肉DNA溯源方法，本方法根据遗传多样性分布特点选择9个单核苷酸多态性SNP作为候选基因，通过PCR反应，PCR-RFLP分析，选择出作为溯源标记的多个单核苷酸多态性SNPs，再由所有有效单核苷酸多态性SNP位点组成一个多个单核苷酸多态性SNPs板用做溯源标记以达到牛肉DNA溯源。本方法能够提供丰富的多态性信息，单核苷酸多态性SNP标记因分布广泛，遗传稳定，并且适宜高通量自动化分析，所以日益成为动物身份识别最受关注的分子标记。

主权项

一种基于SNPs标记的牛肉DNA溯源方法，其特征在于：步骤如下：(1)牛全血基因组DNA的提取；(2)PCR反应：PCR扩增条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，退火30s，72℃延伸30s，共36个循环；最后72℃延伸10min；不同的SNP基因的扩增引物和退火温度根据不同的SNP基因确定，SNP基因为：POU1F1、MGAT2、LPL、PRDM16、PRKAG3、CACNA2DI、MYPN、CAPN3、RARRES2；(3)PCR‑RFLP分析：将扩增成功的片段用于酶切反应，使用9种SNP基因对应的限制性内切酶，再用琼脂糖凝胶电泳检测，拍照统计基因型；(4)对作为溯源标记的SNPs位点进行检测；计算出每个单核苷酸多态性SNP的等位基因频率及杂合度；(5)将每一头来源牛作为溯源标记的SNPs位点信息进行记录；(6)步骤(5)中的某头牛的牛肉有问题，按前述(1)到(4)步骤方法对作为溯源标记的有效多个单核苷酸多态性SNPs位点进行检测；(7)将步骤(6)中检测到的信息与步骤(5)中记录的信息进行对比；(8)根据溯源标记的SNPs的特征信息追溯到牛肉来源。