[发明专利]口蹄疫病毒多种非结构蛋白抗体斑点印迹检测试剂盒及方法

摘要

本发明公开了口蹄疫病毒多种非结构蛋白抗体斑点印迹检测试剂盒及方法，包括五种NSP印迹膜条、血清稀释液、25×浓缩PBST洗涤液、膜显色底物溶液、100×浓缩酶标检测抗体、阳性对照血清和阴性对照血清以及20孔血清稀释板；同时检测五种NSP抗体，可以进一步提高口蹄疫感染动物与免疫动物鉴别诊断的准确性，本方法可以作为3ABC抗体检测阳性与可疑动物的确认诊断方法，具有较高的敏感性与特异性，适于检测牛、羊与猪三种易感动物血清。

主权项

一种口蹄疫病毒多种非结构蛋白抗体斑点印迹检测试剂盒，其特征在于，包括五种NSP印迹膜条、血清稀释液、25×浓缩PBST洗涤液、膜显色底物溶液、100×浓缩酶标检测抗体、阳性对照血清和阴性对照血清以及20孔血清稀释板；所述五种NSP印迹膜条，为真空转印包被了五种非结构蛋白的聚偏氟乙烯膜，这五种非结构蛋白包括3A、3B、2C表位区、3ABC与3D蛋白；所述血清稀释液：含10％马血清，0.25％酪蛋白，1％海藻糖，0.01％硫柳汞的0.01M磷酸盐溶液；所述25×浓缩PBST洗涤液：500mL超纯水中加NaCl 200g、KCl 5g、Na2HPO4·12H2O 72.5g、KH2PO4 5g和12.5mL吐温20，补超纯水定容至1000mL，pH为7.4，高压灭菌，室温存放备用；所述膜显色底物溶液：为单组份膜显色3，3’，5，5’‑四甲基联苯胺底物；所述100×浓缩酶标检测抗体：为辣根过氧化物酶标记的兔抗牛、羊、猪免疫球蛋白G的抗体，通过将HRP酶标抗体稀释于抗体保存液中制备；所述阳性对照血清：采自口蹄疫病毒感染后1～3个月的牛、羊或猪，经检测，非结构蛋白抗体与结构蛋白抗体均为阳性，经无菌处理后加保存剂制备；所述阴性对照血清：采自非免疫健康牛、羊和猪，经检测口蹄疫病毒结构蛋白与非结构蛋白抗体均为阴性，经无菌处理后加保存剂保存。