[发明专利]一种GH18家属几丁质酶基因的克隆方法无效
| 申请号： | 201210097502.1 | 申请日： | 2012-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN102653768A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 朱旭芬;张文武;吴敏 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/10;C12N9/42;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 徐飞虎;徐关寿 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种糖苷水解酶第18家属(GH18家属)——几丁质酶基因克隆的方法。发明利用单一碳源的特殊培养基筛选得到产几丁质酶的细菌，采用独特有效的半嵌套简并引物进行细菌GH18家属几丁质酶基因片段的扩增，然后利用sitefinding PCR方法或反向PCR方法获得全长的几丁质酶基因。然后构建几丁质酶基因的表达质粒，在大肠杆菌中进行基因的诱导表达。本发明的方法有效可靠，建立了一套行之有效的新型GH18家属几丁质基因克隆方法，为最终构建几丁质酶工程菌株，实现工业化生产几丁质酶奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 gh18 家属 几丁质 基因 克隆 方法 | ||
【主权项】：
一种从产几丁质酶的菌株中克隆几丁质酶基因的方法，包括如下步骤：(1)将已知的GH18家属几丁质酶基因进行序列比对，找出核心保守序列；(2)设计能扩增几丁质酶基因片段的简并引物；(3)以产生几丁质酶菌株的基因组为模板，利用简并引物通过半嵌套PCR法扩增细菌几丁质酶部分基因片段；(4)利用获得的部分基因序列，设计嵌套引物，通过sitefinding PCR法或反向PCR法步移获取全长几丁质酶基因。
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