[发明专利]一种去除污水中金属铬的基因的合成及其应用

摘要

本发明公开了一种富集污染水体中低浓度铬含量的基因蛋白的合成及其应用，该方法采用金鱼藻、氯化钙、氯化钾、半知菌、鱼孢菌、培养基为原料，通过提取金鱼藻中耐铬基因片段、体外DNA重组、重组DNA导入受体细胞、筛选获得含耐铬基因的细胞，即耐铬拟球基因蛋白。本发明的使用方法为：将该耐铬拟球蛋白基因的细胞以体积比1：4~8溶解于0.05mo/L氯化钠溶液中，其中，耐铬拟球蛋白基因的浓度为0.20g/L~0.25g/L，注射4~6mL于槐叶萍的根部，给药期为15天，三天注射一次。本发明通过将耐铬拟球基因蛋白注射到水体中槐叶萍的根部，35天后，槐叶萍对铬的富集浓缩因子达到51200~82000。

主权项

一种富集污染水体中低浓度铬含量的基因蛋白的合成及其应用，其特征在于具体制备过程为： (1) 培养基的制备     以质量计，葡萄糖 8~10g、磷酸氢二钾 0.2~0.5g、硫酸镁 0.1~0.2g、琼脂 10~12g、氯化钠 0.8~1.0g、 硫请酸镁 0.1~0.3g、磷酸氢二钾 0.3~0.5g 、牛肉膏 5.0~6.0g、蛋白胨 7.0~10.[微软用户1] ；     将上述物质溶解，加蒸馏水定容至1000mL，分装、在高压蒸汽灭菌锅内杀菌， 杀菌条件为：压力：105Kpa；温度：120°C；时间：20~30min，备用；（2）耐铬DNA片段提取     从金鱼藻细胞中提取DNA分子，用BgIⅡ型限制性内切酶切割DNA分子，获得耐铬基因的DNA序列； (3)体外DNA重组     从半知菌细胞中提取质粒作为运载体，用BgIⅡ型限制性内切酶切割形成开环质粒，加入DNA连接酶，将耐铬基因连接在质粒环上，形成一个重组DNA分子；（4）重组DNA导入受体细胞与筛选     将重组得到的DNA导入用CaCl2处理的鱼孢菌中，接种到15~20mL的培养基中，置于生物培养箱中培养，温度控制在37~37.3°C，培养时间为15~18h；再将该培养液转移到50mL预冷的无菌离心管中，在4~6°C下以300~350r/min的转速离心2~3h，除去上层清液；再用3~5mL 0.1mol/LCaCl2溶液洗涤沉淀，静置10~15min，再4~6°C下以200~400r/min的转速培养35~45min，滤去上层清液，获得细胞沉淀；并筛选含耐铬基因的受体细胞，保存于4~6°C下备用。