[发明专利]Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系有效
| 申请号： | 201210057572.4 | 申请日： | 2012-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN102586286A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 宋志平;覃晓萍;肖满秋;冯延叶;杨忠 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/32 | 分类号： | C12N15/32;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/325;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;盛志范 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物学和生物技术领域，具体为一种人工合成的Bt杀虫蛋白Cry1Ac-a的表达体系。该表达体系包括表达载体和Cry1Ac-a蛋白基因片段，所述基因片段根据大肠杆菌密码子偏爱性进行优化而获得，优化后的Cry1Ac-a蛋白由615个氨基酸组成，分子量为68.7KD，等电点为5.42。本发明还包括利用重组菌株经IPTG诱导获得蛋白高效表达的方法。本发明克服了大肠杆菌表达密码子偏好的缺点，显著降低了mRNA的二级结构，使得该蛋白在大肠杆菌中高表达，为高效、低成本获得Cry1Ac-a蛋白提供了切实可行的解决方案。 | ||
| 搜索关键词： | bt 杀虫 蛋白 cry1ac 表达 体系 | ||
【主权项】：
人工合成的Bt杀虫蛋白的基因，其特征在于是对Cry1Ac编码框和编码序列进行改造和优化而获得，即对Cry1Ac蛋白编码框优化后再进行大肠杆菌密码子偏好优化，并在5’端和3’端分别引入与表达载体一致的NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点，氨基酸序列末端加入终止密码子TAA而获得；其氨基酸序列为SEQ.ID. No.1 所示，记为Cry1Ac‑a ；编码表达的杀虫蛋白氨基酸序列为SEQ.ID. No.2所示。
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