[发明专利]一种双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法

摘要

本发明公开了一种双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法，包括：（1）取活化的0.5cm2斜面母种接种到装有60~120mL液体培养基的250mL培养瓶中，控温21~27℃，90~180rpm振荡培养5~7d得一级摇瓶菌种，按接种量为5~10%转接一级种子到二级培养液进行培养，再将培养好的二级摇瓶液体菌种转接到三级液体培养液进行培养，相同方法依次进行各级培养得种子液；（2）将种子液按5%的接种量接种至装有6L发酵培养基的10L发酵罐进行发酵培养，25℃培养5~6d即可。该方法生产周期短、菌龄一致、生产成本低、接种简便，一支试管种通过五级种培养就可以放大200000倍，液体二级菌种生长速度明显优于固体传统栽培种，速度提高了33%，同时，液体种各级之间的生长速度并没有太大差异，平均满瓶时间是27.5d，完全可以在工厂生产中实际应用。

主权项

一种双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取活化的0.5cm2斜面母种接种到装有60~120mL液体培养基的250mL培养瓶中，控温21~27℃，90~180rpm振荡培养5~7d得一级摇瓶菌种，按接种量为5~10%转接一级种子到二级培养液进行培养，再将培养好的二级摇瓶液体菌种转接到三级液体培养液进行培养，相同方法依次进行各级培养得种子液；其中，各级摇瓶培养条件相同，液体培养基配方为：碳源，氮源10~20g，KH2PO4 1~3g，MgSO4 0.5~1.5g，VB1 10mg，水1000mL，pH5~7；碳源为20~30g的麸皮、玉米粉、葡萄糖、果糖、甘露糖或蔗糖，或20~30mL麦芽汁；氮源为蛋白胨、酵母粉、玉米粉、硫酸铵或硝酸钾；（2）将步骤（1）所得的种子液按5%的接种量接种至装有6L发酵培养基的10L发酵罐进行发酵培养，25℃培养5~6d，即可；其中，发酵培养基配方为：麦麸30g，玉米粉10g，蛋白胨1g，磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁1g、VB1 10mg/L，水1000mL，pH6.5。