[发明专利]一种双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法

说明书

技术领域

本发明属于食用菌培植技术领域，具体涉及一种双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法。

背景技术

双孢蘑菇(Agaricus bisporus)是一种广泛栽培的食用菌，在现有的技术中，双孢蘑菇的生产一般采用固体菌种，但固体菌种具有明显的缺陷，主要表现在生长周期长、菌龄不一致、发菌速度慢、栽培种需用量大、生产成本高等方面，显然不能满足大规模的双孢蘑菇栽培需求。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法，以满足高效培育双孢蘑菇的使用需求。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法，包括以下步骤：

(1)取活化的0.5cm²斜面母种接种到装有60～120mL液体培养基的250mL培养瓶中，控温21～27℃，90～180rpm振荡培养5～7d得一级摇瓶菌种，按接种量为5～10％转接一级种子到二级培养液进行培养，再将培养好的二级摇瓶液体菌种转接到三级液体培养液进行培养，相同方法依次进行各级培养得种子液；其中，各级摇瓶培养条件相同，液体培养基配方为：碳源，氮源10～20g，KH₂PO₄ 1～3g，MgSO₄ 0.5～1.5g，VB₁ 10mg，水1000mL，pH5～7；碳源为20～30g的麸皮、玉米粉、葡萄糖、果糖、甘露糖或蔗糖，或20～30mL麦芽汁；氮源为蛋白胨、酵母粉、玉米粉、硫酸铵或硝酸钾；

(2)将步骤(1)所得的种子液按5％的接种量接种至装有6L发酵培养基的10L发酵罐进行发酵培养，25℃培养5～6d，即可；其中，发酵培养基配方为：麦麸30g，玉米粉10g，蛋白胨1g，磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁1g、VB₁ 10mg/L，水1000mL，pH6.5。

步骤(1)中，碳氮比(g/g或mL/g)优选为3∶1或2.5∶1.5；

步骤(1)中，碳源优选为麸皮、玉米粉或麦芽汁；一级培养最优选使用麦芽汁，二级培养最优选使用玉米粉。

步骤(1)中，氮源优选为蛋白胨、酵母粉或玉米粉，最优选为玉米粉。

步骤(1)中，一级培养时，液体培养基的优选配方为：麦芽汁30mL，玉米粉10g，KH₂PO₄ 1g，MgSO₄ 0.5g，VB₁ 10mg，水1000mL，pH6.5。

步骤(1)中，二级培养时，液体培养基的优选配方为：玉米粉10g，蛋白胨20g，KH₂PO₄ 1g，MgSO₄ 0.5g，VB₁ 10mg，水1000mL，pH6.5。

步骤(1)中，培养条件优选为：装液量为90mL，控温25℃，150rpm振荡培养5～6d，接种量为5％。

有益效果：与现有的固体培养双孢蘑菇菌种方法相比，本发明的双孢蘑菇菌种的液体发酵培养方法具有的明显优势包括：生产周期短、菌龄一致、生产成本低、接种简便，一支试管种通过五级种培养就可以放大200000倍，液体二级菌种生长速度明显优于固体传统栽培种，速度提高了33％，同时，液体种各级之间的生长速度并没有太大差异，平均满瓶时间是27.5d，完全可以在工厂生产中实际应用，具有很好的实用性，能够产生很好的经济效益和社会效应。

附图说明

图1是碳源对菌丝球生长量结果图；

图2是碳源对菌丝球数量影响结果图；

图3是碳源对菌丝球直径影响结果图；

图4是氮源对菌丝球生长量结果图；

图5是不同碳氮比对菌丝球生长量结果图；

图6是pH值对生物量的影响结果图；

图7是培养过程中pH值变化曲线图；

图8是接种液体菌种与固体菌种生长速度比较图；

图9是不同浓度的无机盐培养结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。

以下实施例所使用的材料和方法为：

试验材料：菌种为双孢蘑菇。