[发明专利]一种从成熟红麻叶片中提取DNA的方法

摘要

本发明属于植物分子生物学领域，具体涉及一种高效、稳定地从成熟红麻叶片中提取DNA的方法。本发明结合红麻成熟叶片中含多糖、多酚的特性，在已有的红麻基因组DNA提取方法上，对红麻叶片CTAB法提取基因组DNA提取方法进行改进和优化。运用本发明的方法能获得红麻基因组DNA条带清晰，无拖带，OD260/OD280为1.7-1.9，酶切完全，其质量、产量都高于改良SDS法，可用于扩增叶绿体DNA和线粒体DNA。此发明为进一步开展红麻及其麻类的基因组学及亚细胞基因组组学的研究奠定工作基础。

主权项

一种从成熟红麻叶片中提取DNA的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：称取红麻成熟叶片1.0g，用液氮迅速研磨至粉末状，将粉末装入10ml离心管中，管中加入3ml 65℃预热的重量比为4%CTAB 提取缓冲液，重量比为3%抗氧化剂β‑巯基乙醇；然后冷却至室温，加入等体积的氯仿与异戊醇混合液，混合液中氯仿/异戊醇按体积比为24/1，轻柔颠倒混匀10min；1200rpm 离心10min；吸取上清液转入10ml离心管中，依次加入1/3体积的3 mol/L NaAc溶液及等体积‑20℃预冷的无水乙醇，混匀，冰上沉淀30min；于1200rpm 离心10min；将沉淀移入1.5ml离心管中，用75%无水乙醇漂洗3min，重复1次；将沉淀真空抽干或于室温下吹干，加入100μl TE 溶解沉淀，进行DNA纯化或放入‑20℃冰箱保存备用。