[发明专利]人脐血间充质干细胞的核细胞的分离及培养方法

摘要

本发明提出一种人脐血间充质干细胞的核细胞的分离及培养方法，其应用于人脐血间充质干细胞分化为神经元细胞的二甲基亚矾诱导过程，所述诱导过程应用含二甲基亚矾和丁化轻基苯甲醚的无血清DMEM诱导来源于人脐血间充质干细胞分化成神经元细胞。在无菌条件下收集正常足月剖腹产胎儿的脐带血，经肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞，以偏酸性的培养基进行培养和纯化，获得贴壁细胞，取扩增第三代后的应用二甲基亚矾诱导MSCs向神经元细胞诱导分化，免疫组化标记显示经诱导后的MSCs表达神经丝蛋白(NF)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)。人脐血MSCs在体外可以培养、扩增，应用二甲基亚矾诱导能向神经元样细胞分化，为中枢神经系统的损伤修复提供一种新的细胞来源。

主权项

一种人脐血间充质干细胞的核细胞的分离及培养方法，其应用于人脐血间充质干细胞分化为神经元细胞的二甲基亚矾诱导过程，所述诱导过程包括步骤：脐血的收集和单个核细胞的分离、细胞的培养、纯化及扩增、定向诱导MSCs以及免疫组织化学鉴定；其中所述脐血的收集和单个核细胞的分离方法包括：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的脐带血40‑60ml，肝素抗凝，浓度为20U/ml，所有样本均于采集后12h内分离；用Hank’S平衡盐溶液1∶1稀释、混匀，叠加于Fieoll‑Hypaque上面，相对密度为1.0779/L，稀释血与Fieoll‑Hypaque液的柱高比为2∶1，以2000r/min离心20min，取界面层的单个核细胞；以及加Hank’S平衡盐溶液离心、洗涤两次，加入培养基中，调整细胞浓度为1x106/ml左右。