[发明专利]KLK14蛋白亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法有效
| 申请号： | 201110369655.2 | 申请日： | 2011-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN103122029A | 公开（公告）日： | 2013-05-29 |
| 发明（设计）人： | 陆海荣;黄晋江;李斌宾;黄青山 | 申请（专利权）人： | 复旦大学;上海高科联合生物技术研发有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/81 | 分类号： | C07K14/81;C07K1/22 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人重组SPINK6蛋白的亲和层析纯化方法，包括：将人重组KLK14蛋白与亲和层析介质混合，偶联反应，制得人重组KLK14蛋白亲和层析介质；将人重组SPINK6蛋白通过预先用缓冲液A平衡好的装有上述的胰蛋白酶亲和层析介质的层析柱；然后用缓冲液A清洗上样后的人重组KLK14蛋白亲和层析柱；再用缓冲液B将SPINK6蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰。采用本发明的方法，人重组SPINK6蛋白的活性回收率为45-60％，纯度可达90％-95％，蛋白纯化倍数为10-20倍以上。本发明方法处理速度快、重复性好、柱效长且结合效率基本不变。 | ||
| 搜索关键词： | klk14 蛋白 亲和 层析 纯化 重组 spink6 方法 | ||
【主权项】：
KLK14蛋白亲和层析纯化人重组SPINK6蛋白的方法，其特征在于，其包括步骤：(1)制备亲和层析介质：将人重组KLK14蛋白与亲和层析介质混合，偶联反应，制得人重组KLK14蛋白亲和层析介质；(2)人重组SPINK6蛋白用亲和层析介质进行纯化将人重组SPINK6蛋白通过用pH7.0‑9.0的缓冲液A平衡的装有步骤(1)的人重组KLK14蛋白亲和层析介质的层析柱；然后用pH7.0‑9.0的缓冲液A清洗上样后的人重组KLK14蛋白亲和层析柱；再用pH 2.5‑4.5含0.05‑0.15mol/L NaCl的缓冲液B将SPINK6蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰；所述pH7.0‑9.0的缓冲液A选自PBS、Tris‑HCl缓冲液中的一种或一种以上；所述的pH 2.5‑4.5含0.05‑0.15mol/L NaCl的缓冲液B选自醋酸‑醋酸钠、NaHPO4‑柠檬酸、柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液的一种或一种以上。
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