[发明专利]抑制HIV-1的双长发卡结构RNA表达原件的构建及功能检测无效
| 申请号： | 201110357481.8 | 申请日： | 2011-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN102352360A | 公开（公告）日： | 2012-02-15 |
| 发明（设计）人： | 刘畅;孔晓红;梁之聘;袁青;刁丹红 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/10;C12N15/85;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 天津佳盟知识产权代理有限公司 12002 | 代理人： | 侯力 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 抑制HIV-1的双长发卡结构RNA表达原件构建及功能检测，本发明属基因工程技术领域。本发明根据siRNA的设计原理以及HIV-1序列保守性分析，选择HIV-1的衣壳蛋白gag基因（532－552），包膜蛋白env基因（1428－1448），非结构蛋白tat基因（131－151）和vpu基因（143－161），设计相应siRNA序列，通过两次Two-stepPCR的方法，最终构建双长发卡结构RNA表达原件（序列表SEQIDNo.1所示），通过显微荧光观测以及流式细胞分析定量检测双长发卡结构RNA表达原件对HIV基因EGFP融合蛋白真核表达的抑制效果。实验证实dlhRNA表达原件可以有效抑制HIV多个基因的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 抑制 hiv 发卡 结构 rna 表达 原件 构建 功能 检测 | ||
【主权项】：
抑制HIV‑1的双长发卡结构RNA表达原件(dlhRNA‑VGTE)的基因序列，是序列表SEQ ID No.1所示的序列；该表达原件在真核细胞中，通过聚合酶的作用，转录成RNA，折叠成为dlhRNA的二级结构，在核酸酶Dicer的作用下，被切割成为四个独立的siRNA(19nt)分别行使RNA干扰作用。
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