[发明专利]一种表达BDNF-HA2TAT的重组腺相关病毒及其构建方法

摘要

本发明涉及一种表达BDNF-HA2TAT的重组腺相关病毒及其构建方法。本发明优点在于：本发明构建了携带融合基因BDNF-HA2TAT的腺相关病毒载体BDNF-HA2TAT/AAV，表达BDNF-HA2TAT的重组腺相关病毒即可以分泌表达大分子蛋白BDNF，表达的BDNF又有穿过血脑屏障作用，同时将BDNF基因序列导入AAV载体，可以持续分泌表达BDNF，解决了BDNF需反复给药的难题；通过抗抑郁效力筛选实验证明了可分泌表达BDNF-HA2TAT的重组腺相关病毒具有抗抑郁的作用，建立了一种有效预防和治疗抑郁障碍和应激障碍等精神疾病的手段和方法。

主权项

一种表达BDNF‑HA2TAT的重组腺相关病毒，其特征在于，所述的表达BDNF‑HA2TAT的重组腺相关病毒是由下列方法构建得到的：a、克隆BDNF cDNA 融合基因，将 PCR产物连接入pGEM‑T Easy载体，获得的pGEM‑T Easy/BDNF转化受体菌E.Coli DH5α，碱裂解法提取重组质粒 DNA；b、酶切获取带有粘性末端的BDNF基因，将BDNF基因插入携带穿膜肽TAT的载体质粒pSSCMV‑HA2TAT，构建重组载体质粒pSSCMV‑BDNF‑HA2TAT；c、在磷酸钙作用下，重组载体质粒pSSCMV‑BDNF‑HA2TAT、包装质粒pAAV/Ad和辅助质粒pFG140三质粒共转染HEK293细胞，转染的包装细胞继续培养，收获病毒上清，即表达BDNF‑ HA2TAT的重组腺相关病毒。