[发明专利]使人的体细胞逆向分化产生自体胰腺干细胞和自体胰岛的方法、试剂盒及其应用

摘要

本发明提供了一种使人的体细胞逆向分化产生自体胰腺干细胞和自体胰岛的方法，所述方法包括：采用含有不同植物提取物和蛋白成分的培养液分步骤培养人的体细胞，从而使所述体细胞逆向分化产生自体胰腺干细胞，进而培养产生自体胰岛。本发明的方法在2-3周内即可产生几百亿数量级别的第1代自体胰腺干细胞和自体胰岛细胞。这种植物和蛋白诱导性人自体胰腺干细胞具有与人自然胰腺干细胞类似的细胞特异表型和多种细胞分化能力，该自体胰腺干细胞及自体胰岛细胞不仅对胰岛素缺乏型糖尿病等胰腺疾病治疗应用领域，而且在自体胰腺组织工程领域具有巨大潜力，本发明还适用于建立新型的自体胰腺干细胞库，长期永久保存自体胰腺干细胞。

主权项

一种使人的体细胞逆向分化产生自体胰腺干细胞的方法，其中，所述方法包括：将人的体细胞在细胞培养液C1中培养48‑72小时，所述细胞培养液C1为RPMI 1640，并含有苦瓜提取物5‑100mg/ml、Y‑27632 1‑25μM、干细胞因子1‑100ng/ml、白细胞介素3 1‑100ng/ml、白细胞介素6 1‑100ng/ml；然后换用细胞培养液C2培养9‑15天，所述细胞培养液C2为RPMI 1640，并含有苦瓜提取物5‑100mg/ml、天麻提取物5‑100mg/ml、Y‑27632 1‑25μM、干细胞因子1‑100ng/ml、白细胞介素3 1‑100ng/ml、白细胞介素6 1‑100ng/ml，从而获得植物和蛋白诱导性自体胰腺干细胞；优选地，在5％CO2和37℃条件下进行细胞培养。