[发明专利]毛竹微卫星分子标记的开发与应用无效
申请号: | 200910102125.4 | 申请日: | 2009-08-13 |
公开(公告)号: | CN101629196A | 公开(公告)日: | 2010-01-20 |
发明(设计)人: | 汤定饮;卢江杰;周明兵 | 申请(专利权)人: | 浙江林学院 |
主分类号: | C12P19/34 | 分类号: | C12P19/34;C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人: | 周 烽 |
地址: | 311300*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 一种毛竹微卫星分子标记的开发,经过毛竹DNA序列的获得,含有微卫星位点的筛选,引物设计和微卫星位点的验证三步骤,最后获得19对微卫星分子标记引物,探索出其适宜的退火温度为46-59℃,再将毛竹微卫星引物经DNA聚合酶链式反应应用于其他6种刚竹属竹种,扩增并测序确认继而获得102条含有微卫星位点的刚竹属DNA序列。采用本方法开发竹类的微卫星分子标记,具有简单、快速、稳定、高效和低成本的优点,为竹子的辅助育种提供了新的工具。 | ||
搜索关键词: | 毛竹 卫星 分子 标记 开发 应用 | ||
【主权项】:
1,一种毛竹微卫星分子标记的开发方法,其特征包括如下步骤:(1)毛竹DNA序列的获得:用毛竹的拉丁文学名作为关键词,在美国国立卫生研究院维护的基因序列数据库中检索并下载获得;(2)含有微卫星DNA序列的筛选:用单机版微卫星分析程序和在线微卫星位点分析软件,对下载的序列进行筛选,获得含有微卫星位点的毛竹DNA序列;(3)引物设计和微卫星位点验证:①引物设计:用引物设计软件设计扩增含有微卫星位点的DNA聚合酶链式反应引物,引物含有碱基数控制在18-22个,两引物退火温度差<4℃,扩增的DNA片段在350个碱基以内;②微卫星验证:利用上述引物进行DNA聚合酶链式反应扩增、扩增产物的电泳分离、银染检测、微卫星位点的再扩增、亚克隆和测序确认工作,最后得到19对毛竹微卫星标记引物,其退火温度在46℃-59℃。
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