[发明专利]孝顺竹高效稳定再生体系建立的方法

摘要

孝顺竹高效稳定再生体系建立的方法，其特征包括：外植体消毒、愈伤组织诱导与增殖、愈伤组织分化与生根、以及壮苗移栽过程。本发明解决了孝顺竹(Bambusa multiplex)通过愈伤组织再生植株的困难问题，将为丛生竹生物技术育种提供技术平台。本发明涉及林木生物技术和组织培养领域，特别涉及孝顺竹高效稳定再生体系的建立。

主权项

孝顺竹(Bambusa multiplex)高效稳定再生体系建立的方法，其特征包括：外植体消毒、愈伤组织诱导与增殖、愈伤组织分化与生根、以及壮苗移栽过程，具体步骤如下：(1)外植体消毒：选择健康饱满的种实先用75％(v/v)乙醇处理1分钟；再用0.1％(w/v)升汞(每升加5-6滴吐温-80)浸泡15分钟；然后用无菌水冲洗数次；最后用无菌纸吸干种实表面水分后待接种。(2)愈伤组织诱导与增殖：将消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基上暗培养3-14天使愈伤组织形成；然后将色泽淡黄致密的愈伤组织分离出来接种到继代增殖培养基上暗培养14-21天。所述诱导与增殖培养基是以NB培养基为基础，添加：2，4-D(2-10mg/L)、卡拉胶(8-10g/L)、脯氨酸(400-600mg/L)、谷氨酰胺(400-600mg/L)、水解酪蛋白(200-400mg/L)。(3)愈伤组织分化与生根：将继代增殖培养后的愈伤组织接种到预分化培养基上培养3-7天；然后转到分化培养基上培养10-30天；待愈伤组织产生0.1-1.5cm丛芽后将丛芽切割下来接种到生根培养基上，7-15天后丛芽生根。光照时间12小时/日，光照强度800-2000lux。所述预分化培养基是以MS培养基为基础，添加KT(2-5mg/L)、6-BA(2-5mg/L)、卡拉胶(8-10g/L)。分化培养基是以MS培养基为基础，添加卡拉胶(8-10g/L)。生根培养基以MS培养基为基础，添加NAA(1-5mg/L)、卡拉胶(8-10g/L)。(4)壮苗与移栽：将生根的再生竹株移栽到壮苗培养基中培养7-15天；开瓶炼苗2-3天；取出小苗清洗根部培养基；再用低浓度高锰酸钾溶液清洗根部；然后将小苗栽植到灭菌的介质中，遮阴散射光培养一个月后多数幼苗成活。所述的壮苗培养基是以MS培养基为基础，添加NAA(2-5mg/L)、BA(2-5mg/L)、卡拉胶(8-10g/L)。