[发明专利]一步纯化固定化γ-内酰胺酶及拆分(±)γ-内酰胺的方法无效
| 申请号： | 200910084258.3 | 申请日： | 2009-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN101544972A | 公开（公告）日： | 2009-09-30 |
| 发明（设计）人： | 郑国钧;林建东;王建军;张星;曹燕萍 | 申请（专利权）人： | 北京化工大学 |
| 主分类号： | C12N11/10 | 分类号： | C12N11/10;C12N11/04;C12P13/02 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘 萍 |
| 地址： | 100029北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于酶工程领域，具体说一步纯化固定化γ-内酰胺酶及拆分(±)γ-内酰胺的方法。本发明是将γ-内酰胺水解酶固定在Ni-NTA琼脂糖亲和柱上，并在柱上水解(+)γ-内酰胺，从而拆分(±)γ-内酰胺。将带有硫磺矿硫化叶菌耐热γ-内酰胺水解酶基因的质粒转入大肠杆菌，构建能表达N端与C端均带组氨酸标记的γ-内酰胺水解酶的基因工程菌或N端与C端仅一端带组氨酸标记的γ-内酰胺水解酶的基因工程菌。然后将带组氨酸标记的该酶一步纯化固定化在Ni-NTA琼脂糖亲和柱上，并使(±)γ-内酰胺底物在pH值5～10，温度30～100℃条件下，在柱上连续转化，转化率可保持在80％以上，产物的光学纯度＞99％。 | ||
| 搜索关键词： | 一步 纯化 固定 内酰胺 拆分 方法 | ||
【主权项】：
1、一步纯化固定化γ-内酰胺酶及拆分(±)γ-内酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)γ-内酰胺水解酶的固定化：其特征是将N端与C端均带组氨酸标记的γ-内酰胺水解酶的基因工程菌或N端与C端仅一端带组氨酸标记的γ-内酰胺水解酶的基因工程菌，用上样缓冲液悬浮，然后采用超声破碎，破碎上清液流过Ni-NTA琼脂糖或Ni-NTA葡聚糖填料的亲和柱，将固定上该酶的亲和柱用水保存，待用；(2)(±)γ-内酰胺的拆分：其特征是将固定上该酶的亲和柱置于30～100℃的水浴中，在该酶最适pH值5～10下，将2～20g·L-1的底物(±)γ-内酰胺连续流过的亲和柱，连续转化。
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